научная статья по теме ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ «ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И ИХ РОЛЬ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ», ПРОВОДИМАЯ В РАМКАХ ОБЪЕДИНЕННОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ФОРУМА 2013, ПРИ ФИНАНСОВОЙ ПОДДЕРЖКЕ РФФИ (ПРОЕКТ № 13-04-06041-Г) Биология

Текст научной статьи на тему «ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ «ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И ИХ РОЛЬ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ», ПРОВОДИМАЯ В РАМКАХ ОБЪЕДИНЕННОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ФОРУМА 2013, ПРИ ФИНАНСОВОЙ ПОДДЕРЖКЕ РФФИ (ПРОЕКТ № 13-04-06041-Г)»

Объединенный иммунологический форум, Нижний Новгород 2013

Всероссийская научная конференция «Дендритные клетки и их роль в норме и при патологии», проводимая в рамках

Объединенного иммунологического форума 2013, при финансовой поддержке РФФИ (проект № 13-04-06041-г)

Клиническая и иммунологическая эффективность вакцинотерапии на основе незрелых костномозговых дендритных клеток (ДК) в сочетании с фотодинамической терапией (ФДТ) и циклофосфамидом (ЦФ) Балдуева И. А., Нехаева Т. Л., Новик А. В., Данилова А. Б., Комаров Ю. И., Данилов А. О., Воробейчиков Е. В., Вааль А. И. ФГБУ «НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Введение: Иммунотерапия незрелыми CD14CD1a+CD83-костномозговыми предшественниками ДК, сенсибилизированными фотомодифицированными опухолевыми клетками in vivo (ФДК-вакцина) является перспективным методом лечения, который в экспериментальных доклинических исследованиях активирует специфический противоопухолевый иммунный ответ. Материалы и методы: В исследование включено 14 больных диссеминирован-ной меланомой кожи, выполнено 37 пятидневных циклов (от 1 до 6 у каждого больного). Технология приготовления ДК-вакцины заключалась в мобилизации предшественников ДК из костного мозга в периферическую кровь с помощью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (5 мкг/кг массы тела пациента подкожно в течение 4-5 дней), операции афереза, дифференцировки предшественников в ДК в сбалансированной безсывороточной питательной среде «CellGro DC» (CellGenix, Германия) с гранулоцитарно-макрафагальным колониестимулирующим фактором, 72 нг/мл (CellGenix, Германия; Millipore, США; Фармсинтез, Россия) и интерлейкина-4 (45 нг/мл, CellGenix, Германия) в течение 5 дней, сеанса фотодинамической терапии и 5-дневного цикла вну-триопухолевого введения аутологичных незрелых ДК (106/кг массы тела пациента) в предварительно ФДТ-облученный метастатический очаг. Для элиминации иммуносупрессирующих регуляторных Т-лимфоцитов за 3 дня до начала лечения вводили ЦФ в дозе 300 мг внутримышечно. Интервал между циклами - 14 дней. Исследование иммунологических показателей проводили перед каждым циклом вакцинотерапии. Оценивали субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток (метод проточной цитометрии) и специфический поствакцинальный иммунный ответ (ELISpot-анализ и клеточная ELISA). Результаты: Анализ иммунологических показателей проводили у больных с наличием клинического эффекта (КЭ) и прогрессированием заболевания (ПЗ) в процессе ФДК-вакцинотерапии. При оценке противоопухолевого иммунного ответа у больных с КЭ титр меланома-ассоциированных антител (IgG) до и после 5-дневного цикла вакцинотерапии находился в интервале 1:10-1:80 (метод клеточной ELISA). Продукция интерферон-гамма (IfN-y) опухоль-специфическими Т-лимфоцитами (ELISpot-анализ) статистически достоверно повышалась к началу 2-го цикла терапии с 53,6 до 70,5 спот/105 МНК (p=0,011; <0,05), и к началу 3-го цикла лечения достигала 87,6 спот/105 МНК. У больных с ПЗ титр специфических IgG до начала лечения составлял 1:10-1:640, после 1-го цикла вакцинотерапии снизился до 1:10-1:160. Продукция IFN-y опухоль-специфическими Т-лимфоцитами до лечения и в процессе вакцинотерапии увеличилась с 60,8 до 99,0 спот/105 МНК, вместе с тем, эти различия не были статистически значимыми (p=0,12). Выводы: ФДК-вакцинотерапия в сочетании с иммуномодулирующими дозами ЦФ вызывает клинический, специфический клеточный и гуморальный иммунный ответ, является перспективным методом системного лекарственного лечения больных диссеминированной меланомой кожи.

Антимеланомные вакцины

Барышников А. Ю., Бурова О. С., Голубцова Н. В., Морозова Л. Ф., Чкадуа Г. З., Бармашов А. Е., Барышникова М. А., Афанасьева Д. А., Барышников К. А., Михайлова И.Н.

Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

Актуальность. Поиск новых путей лечения дессиминированной меланомы кожи является актуальной задачей в онкологии.

Цель работы. Создание вакцин для лечения больных с дессиминированной меланомой кожи.

Методы. Материалом для создания вакцин послужили 19 стабильных клеточных линий меланомы человека, полученных из опухолевой ткани пациентов с диссеминированной меланомой. Для определения иммунологической эффективности вакцин проводили контроль экспрессии активационных антигенов, оценку гранзим-содержащих и ИФН-у-продуцирующих клеток, определение цитокиного профиля и онкомаркеров сыворотки крови, НКТ-клеток и уровень растворимых антигенов.

Результаты. Получены 2 оригинальные вакцины: «Мелавак», состоящая из опухолевых клеток линии mel Kor, трансфецированных геном ГМ-КСФ, и «Дендритная» вакцина, состоящая из аутологичных дендритных клеток, нагруженных in vitro опухолевым лизатом. Проведены 1 и 2 фазы клинических испытаний на больных дессиминированной меланомой кожи III и IV стадии. Вакцины показали безопасность в доклинических исследованиях, не проявляли острой, хронической токсичности и туморогенности. Побочные эффекты вакцинации пациентов с меланомой проявлялись в виде ранних кратковременных и обратимых осложнений: локальной гиперемии (64 %) и общей гипертермии (26 %). После второй вакцинации у больных наблюдалась реакция гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ), усиливающаяся при последующих вакцинациях. Исследование методом ELISpot иммунного ответа у больных меланомой, получавших иммунотерапию дендритноклеточной или генно-модифицированной вакциной, выявило увеличение числа мононуклеарных клеток периферической крови, синтезирующих ИФН-у в ответ на стимуляцию лизатом опухолевых клеток, использовавшихся длявакцинации, примерно у трети больных. Выявлено, что уровень растворимых молекул HLA I класса и CD8 коррелирует с уровнем S-100 в процессе вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками. Установлено, что у больных с диссеминированной меланомой кожи при вакцинации аутологичной дендритной вакциной наблюдается снижение изначально повышенных сывороточных уровней ("Ш2-тип цитокинов) и повышение уровня относительного содержания ИЛ-2 (Thl-тип цитокинов), которое свидетельствует об активации клеточного звена противоопухолевого иммунитета. При дендритной вакцинотерапии специфических иммуноглобулинов против поверхностных антигенов не обнаружено, однако при вакцинации «Мелавак» обнаружено появление специфических антител против внутриклеточных антигенов в сыворотке крови. Разрабатывается липосомальная форма противоопухолевой вакцины с использованием опухолевых лизатов из клеточных линий меланомы.

Влияние белка теплового шока 70 на АТФ-индуцированный хемотаксис дендритных клеток

Болховитина Е. Л., Сапожников А. М., Шевченко М. А. Институт биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва, Россия

Миграция дендритных клеток (ДК) в ответ на ингаляцию аллергена играет важную роль в развитии аллергического воспаления дыхательных путей. Одним их факторов, является внеклеточный АТФ, так называемый «сигнал опасности», повышение концентрации которого наблюдается под воздействием стрессовых факторов. Связываясь с пуринергическими рецепторами (P2X и P2Y рецепторы) на поверхности ДК, АТФ вызывает их активацию и последующее усиление воспалительного ответа. Белки теплового шока 70 кДа (БТШ70) также относят к «сигналам опасности», так как повышение концентрации этих белков наблюдается при воспалительных процессах. Однако шаперонная активность БТШ70 позволяет предположить, что их синтез при стрессе носит протективный характер. Кроме того, характерной особенностью БТШ70 является способность связывать АТФ с последующим дефосфорилированием до АДФ. Так как АТФ является хемоат-трактантом для незрелых дендритных клеток, дефосфорилирование его до АДФ, обладающего менее выраженным хемотаксической активностью, позволит снизить количество мигрировавших дендритных клеток и, следовательно, предотвратить дальнейшую прогрессию воспаления. Целью данной работы было исследование влияния БТШ70 на АТФ-направленный хемотаксис дендритных клеток в условиях in vitro.

Дендритные клетки выращивали из выделенных из костного мозга предшественников в течение 9 дней в присутствии ГМ-КСФ. Хемотаксический тест проводили с использованием планшетов ТгатшеИ. Для определения влияния БТШ70 на миграционную активность использовали АТФ, АДФ, БТШ70 и смесь БТШ70 с АТФ в соотношении 1:1, в концентрациях 1*10-6 М. Индекс хемотак-сической активности определяли как отношение количества клеток, мигрировавших в ответ на соответствующий аттрактант к количеству клеток, мигрировавшему в ответ на добавление фосфатного буфера. Наиболее выраженным хемотаксическим эффектом при равных концентрациях, как и предполагалось, обладал АТФ, причем в указанном диапазоне эффект был прямо пропорционален концентрации. БТШ70 так же обладал способностью вызывать миграцию дендритных клеток, однако индекс хемотаксиче-ской активности в диапазоне используемых концентраций был значительно ниже, чем в случае АТФ (р<0,01). В концентрации 1*10-6 М хемотаксическая активность АДФ была значительно ниже активности БТШ70. При добавлении БТШ70 в соотношении 1:1, способность АТФ вызывать миграцию дендритных клеток снижалась вдвое, и индекс хемотаксиса становился сопоставимым с индексом в случае использования одного БТШ70. Таким образом, при одинаковых концентрациях хемотаксическая активность возрастала в ряду АДФ < БТШ70 < АТФ; в присутствии БТШ70 АТФ терял способность вызывать миграцию дендритных клеток.

Подходы стимуляции противооопухолевого иммунного ответа с помощью дендритных клеток в культуре мононуклеарных клеток больных колоректальным раком

Куликова Е. В.1, Якушенко В. К.2, Соколов А. В.3

1 Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН,2 МБУЗ «Городская клиническая больница № 11»,3 МБУЗ «Городская клиническая больница № 1», Новосибирск, Россия

Актуальность. В настоящее время активно ведется поиск и разработка эффективных противоопухолевых вакцин на основе дендритных клеток (ДК), нагруженных различными опухолевыми антигенами, в том числе с помощью ДНК-конструкций, несущих определенные последов

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком