научная статья по теме ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ БИС[3-(4-ХЛОР ФЕНИЛ)-1-(4-МЕТИЛФЕНИЛ)КАРБОКСАМИДО-1,3- ПРОПАНДИОНАТО] ОКСОВАНАДИЯ Биология

ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ БИС[3-(4-ХЛОР ФЕНИЛ)-1-(4-МЕТИЛФЕНИЛ)КАРБОКСАМИДО-1,3-ПРОПАНДИОНАТО] ОКСОВАНАДИЯ

Юшкова Т. А., Краснова А. И., Пулина Н. А.

ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России,

Пермь, Россия

Изучена иммунотропная активность бис[3-(4-хлорфенил)-1-(4-метилфенил) карбокса-мидо-1,3-пропандионато] оксованадия в сравнении с метформином. Введение оксована-диевого комплекса характеризуется нормализацией количества и состава лейкоцитов, уменьшением процессов ауторозеткообразования.

Ключевые слова: иммунотропная активность, оксованадиевый комплекс

На сегодняшний день имеется множество подтверждений участия иммунологических сдвигов в патогенезе и прогрессировании сахарного диабета (СД) [1]. Установлено, что развитие микроангиопатий при инсулинозависимом и инсулиннезависимом СД связано с хроническим иммуновоспалительным процессом и с образованием иммунных комплексов. Непосредственное участие в этом принимают активированные моноциты-макрофаги, иммуноглобулины, цитокины, адгезивные молекулы, продукты конечного гликозилирования. [2]. Вместе с тем, вопросы, касающиеся состояния клеточного и гуморального иммунитета при разных типах сахарного диабета изучены недостаточно. В связи с этим, важным остается изучение возможности коррекции иммунных нарушений у больных сахарным диабетом с помощью новых препаратов, обладающих имму-номодулирующими свойствами.

Рассматривая возможность потенцирования фармакологических эффектов ароилпиро-виноградных кислот путем их хелатирования с микроэлементами, ранее нами был получен новый оксованадиевый комплекс (ОВК) - бис [3-(4-хлорфенил)-1-(4-метилфенил)карбокса-мидо-1,3-пропандионато] оксованадий, у которого была обнаружена высокая гипогли-кемическая активность [3]. Представляло интерес изучить иммунотропные свойства полученного хелата.

Цель работы - изучение иммунотропной активности бис [3-(4-хлорфенил)-1-(4-метил-фенил) карбоксамидо-1,3-пропандионато] ок-сованадия.

Материал и методы. О реакции иммунной системы на воздействие ОВК судили по количеству Т-, В-лимфоцитов, динамике популя-ционного состава лейкоцитов, а также по числу лимфоцитов, участвующих в реакции ауторозеткообразования в крови животных с аллоксан-индуцированным сахарным диабетом.

Экспериментальную гипергликемию моделировали внутрибрюшинным введением аллоксана тригидрата («Alfa Aesar®») в дозе 170 мг/кг [4]. Эксперименту подвергали животных, у которых развивалась острая гипергликемия через 72 часа после введения диа-бетогена. Критерием включения животных в эксперимент служил уровень глюкозы в крови в пределах 15-19 ммоль/л. Исследуемый хе-лат вводили в виде взвеси в 2% крахмальном растворе в дозе 50 мг/кг. Так как оксована-диевый комплекс проявляет выраженный са-хароснижающий эффект, для сравнительной оценки в качестве препарата сравнения была использована субстанция метформина гидрохлорида (ОАО «Фармакон») [5].

Определение числа Т-, В-лимфоцитов в крови определяли с использованием дифференциальных маркеров (Sandos Pharma AG, Brasil, Switzerland) [4].

Постановку реакции ауторозеткообразо-вания лимфоцитов проводили согласно стандартным методикам. Приготовленный мазок фиксировали в этиловом спирте, окрашивали по Романовскому-Гимзе и микроскопировали под иммерсией. Подсчитывали 100 лимфоцитов, отмечая среди них% клеток, фиксировав-

Тематический выпуск «Российский научный форум на Урале»

759

ших на своей поверхности 3 и более аутоэри-троцитов [6].

Работа выполнена в соответствии с международными этическими и научными стандартами качества планирования и проведения исследований на животных. Результаты обработаны статистически при помощи программ Windows XP (Excel). В зависимости от нормальности распределения полученных результатов использовались методы параметрической (критерий Стьюдента) и непараметрической (критерий Манна-Уитни) статистики. Результаты представлены в виде М±т (М - среднее значение, т - средняя арифметическая ошибка). Различия считали достоверными при уровне р < 0,05.

Результаты и обсуждение. Исследования показали, что развитие аллоксанового диабета сопровождалось развитием выраженных изменений со стороны иммунной системы, что подтвердило «химико-иммунологическую» природу данной модели заболевания. Так, в экспериментах были отмечены нарушения морфологического состава периферической крови, в частности, аллоксан вызвал лейкопению, о чем свидетельствовало уменьшение лейкоцитов более чем в 1,5 раза (Р<0,001), по сравнению с интактной группой животных (табл.). При анализе состояния лимфоцитов на фоне СД было установлено, что их общее количе-

ство достоверно не изменялось по сравнению с интактным контролем. При этом отмечалось уменьшение количества нормальных лимфоцитов с ростом их патологических форм - в 4,7 раза возросло число атипичных лимфоцитов, в 2,9 раза и 3,5 раза - широкоплазменных и больших гранулярных лимфоцитов соответственно. Кроме того, наблюдалась моноцито-пения, о чем свидетельствовало уменьшение количества моноцитов в 4 раза (табл.). Полученные нами результаты подтвердили наличие определенных гемолитических свойств у аллоксана.

Развитие аллоксанового СД сопровождалось угнетением клеточного звена иммунитета, о чем свидетельствовало уменьшение количества Т-лимфоцитов с 41% (интактный контроль) до 25% (алл. диабет) (Р<0,05), что свидетельствует о нарушении со стороны клеточного звена иммунной системы. При этом отмечалась гиперактивация гуморального звена, что выражалось возрастанием уровня плазматических клеток (табл.) и увеличением в крови крыс с экспериментальным диабетом числа В-лимфоцитов с 20,5% (интактный контроль) до 36,5% (аллоксановый диабет) (Р<0,001).

Кроме того, на фоне экспериментального диабета уровень Т-лимфоцитов, участвующих процессе аутологичного розеткообразования, увеличился в 3 раза по сравнению с показате-

Таблица. Динамика популяционного состава лейкоцитов периферической крови животных

Показатели Контроль (инт) Аллоксан ОВК Метформин

фон фон фон 2 ч фон 2 ч

Общее кол-во лейкоцитов х109/л 10,1±0,4 8,3±0,2*! 8,6±0,6 9,3±0,5 5,7±0,2 8,6±0,2

Базофилы,% 0,3±0,2 0,8±0,3 0,7±0,3 0,0±0,0 0,7±0,3 0,0±0,0

Эозинофилы,% 0,7±0,2 1,2±0,3 1,7±0,3 0,7±0,3 1,0± 0,6 0,7±0,3

Нейтрофилы

Палочкоядерные,% 0,7±0,2 0,7±0,2 0,7±0,3 1,0±0,0 0,7±0,3 0,7±0,3

Сегментоядерные,% 23,7±0,5 15,0±0,5*! 15,3±0,9 22,3± 1,5*2 16,0±1,2 24,7±0,9*2

Лимфоциты

Нормальные,% 58,3±1,7 20,8± 1,0***! 22,7± 1,7 57,0 ±3,6**2 26,7±1,5 43,7±3,3**2

Атипичные,% 6,5±0,8 29,7±0,7**! 32,0± 2,1 9,7±0,9**2 23,3± 1,2 12,0±0,6*!**2

Широкоплазменные,% 3,8±0,4 14,7±1,0**1 14,0±2,3 3,3±0,9**2 14,3± 1,2 5,0±0,6***2

Большие гранулярные,% 2,8±0,4 13,0±0,6**j 13,3± 1,9 2,7±0,7***2 12,3±0,9 5,3±0,9**2

Моноциты,% 2,8±0,3 0,7±0,2 0,3±0,3 2,7±0,3*2 0,7±0,3 3,0±0,6

Плазматические клетки,% 0,3±0,2 3,5±0,5*1 2,3± 0,7 0,7±0,3*2 4,3±0,7 1,3±0,3

Примечание: *=р<0,05, **=р<0,01, ***=р<0,001

1 - по сравнению с контролем (инт), 2 - по сравнению с контролем (алл.диабет) РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2014, том 8 (17), №3

лями интактного контроля и составил 49,5±1,8 (Р<0,001). Через 2 часа количество учитываемых Т-лимфоцитов не менялось по сравнению с фоновыми показателями. Полученные данные свидетельствуют о возможном аутоиммунном генезе развития заболевания, что связано, по-видимому, со способностью аллоксана изменять антигенную структуру ß-клеток.

В ходе проведенных исследований было установлено, что введение ОВК устраняло имммуносупрессию клеточного звена иммунитета, о чем свидетельствовало увеличение в числа Т-лимфоцитов с 25% до 35% (Р<0,05), а также нормализовало В-клеточное звено, что характеризовалось уменьшением количества В-лимфоцитов до фоновых показателей контрольной группы. Также необходимо отметить, что ОВК уменьшал выраженность аутоиммунных процессов, что характеризовалось уменьшением количества аутологичных розет-кообразующих клеток в 1,7 раза (до 26,3±1,8), по сравнению с первоначальными показателями. Влияние оксованадиевого комплекса на лейкоцитарный пул клеток характеризовалось восстановлением количества лейкоцитов у крыс с экспериментальным СД до уровня интактных животных, отсутствием изменений общего количества лимфоцитов, увеличением количества нормальных лимфоцитов и уменьшением атипичных, широкоплазменных и больших гранулярных лимфоцитов (табл.). Кроме того, ОВК восстанавливал количество моноцитов у крыс с аллоксановым диабетом до показателей ин-тактной группы животных и уменьшал число плазматических клеток в 5 раз (Р<0,001) (табл.). Следует отметить, что увеличение числа моноцитов до контрольного уровня свидетельствует не только об устранении иммунносупрессии, но и восстановлении кооперации клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Что касается влияния на иммунную систему субстанции антидиабетического препарата мет-формина, то его введение также способствовало нормализации состояния клеточного звена иммунитета. Об этом свидетельствует увеличение в 1,7 раза числа Т-лимфоцитов (P<0,001) до показателей контрольной группы здоровых животных. Влияние метформина на гуморальное звено проявилось уменьшением количества В-лимфоцитов также до фоновых показателей интактного контроля. При анализе влияния метформина на выраженность аутологичного розеткообразования лимфоцитов у крыс с ал-локсановым диабетом, было установлено, что препарат не оказывал выраженного эффекта на количество Т-лимфоцитов, участвующих в аутоиммунных процессах.

Таким образом, развитие аллоксанового диабета сопровождается выраженным дисбалансом в иммунной системе. Введение бис[3-(4-хлорфенил)-1-(4-метилфенил)карбокса-мидо-1,3-пропандионато] оксованадия (II) уменьшает выраженность аутоиммунных нарушений, что свидетельствует о наличии иммуно-тропной активности и обосновывает проведение дальнейших углубленных исследований.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Асфандиярова Н. С., Колчева Н. Г., Шатрова И. В. и др. Проблемы эндокринологии 1998, 6, 3-6.

2. Хаитов P. M., Дедов И. И., Брыкова С В. и др. Проблемы эндокринологии 1992, 2, 8-12.

3. Пулина Н. А., Юшкова Т. А., Краснова А. И., Юшко

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.