ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ В ГЕНАХ TLR9, TNF И DEFB1 С ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫМИ РОДАМИ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕНЕЗА И С РАЗВИТИЕМ ПНЕВМОНИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ
Свитич О. А.1, Алиева А. И.2, Рассказова Н.Д.1, Семенова Е.А.1, Малушенко С. В.3, Ганковская Л. В.3
ФГБУ «НИИ ВС им. И. И. Мечникова» РАМН, Москва; Дагестанская государственная медицинская академия, Махачкала; 3ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н. И. Пирогова Минздрава
России, Москва, Россия
Известно, что во время беременности происходит изменение баланса между факторами врожденного и адаптивного иммунитета. Инфицирование организма матери может приводить к развитию патологии беременности и новорожденных. Целью данной работы являлось исследование ассоциации генетических маркеров G(+2848)A (ген TLR9), G(-52A (ген DEFB1) и -308 G/A (ген TNF-a) с риском преждевременных родов инфекционного ге-неза и с развитием пневмонии у новорожденных. Определение полиморфных маркеров проводили с помощью ПЦР-РВ в присутствие интеркаллирующих красителей и TaqMan зондов. Получены следующие результаты: аллель А и генотип АА (G(+2848)A в гене TLR9) ассоциированы со срочными родами, а AG - с риском развития пневмонии у новорожденных. C риском развития пневмонии у новорожденных ассоциированны генотипы AG (-308 G/A в гене TNF) и CG C (-44) G.
Ключевые слова: врожденный иммунитет, патология плода, полиморфные маркеры
Введение. Известно, что во время беременности происходит изменение баланса между факторами врожденного и адаптивного иммунитета. Инфицирование организма матери может приводить к развитию патологии беременности и новорожденных (невынашивание беременности, инфекционные заболевания новорожденных и др.) [1, 2].
Эффективность работы иммунной системы во время беременности во многом определяется активностью врожденного иммунитета. Так, к примеру, рецепторные механизмы (То11-подобные рецепторы - TLRs) врожденного иммунитета могут активировать выработку цитокинов (ГИ, ГЬ-6, ГЬ-12 и др.) и противо-микробных пептидов [3, 4]. Цитокиновый профиль определяет интенсивность и продолжительность иммунного ответа, изменения в котором могут сказаться на нормальном течении беременности. Нарушения в функционировании молекул врожденного иммунитета могут быть обусловлены генетическим поли-
морфизмом [5, 6], поэтому исследование распределения частот и аллелей полиморфизмов в генах иммунитета (TLRs, цитокинов и про-тивомикробных пептидов) матери и ребенка является актуальным для прогнозирования развития риска патологии беременности и новорожденных.
Цель данной работы - исследование ассоциации генетических маркеров G(+2848)A (ген TLR9), G(-52)A (ген DEFB1) и -308 G/A (ген TNF-a) с риском преждевременных родов инфекционного генеза и с развитием пневмонии у новорожденных.
Материал и методы. В данной работе были исследованы три клинические группы: группа женщин с преждевременными родами (173 пациента), группа женщин, родивших детей с пневмониями (47 пациентов), также была группа сравнения - здоровые беременные женщины без инфекционной и других патологий, родившие здоровых доношенных детей (70 пациентов). В группе новорожденных де-
872
Инфекционная иммунология
тей с пневмонией определяли Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia, Klebsiella и Pseudomonas aeruginosa.
Клиническим материалом для исследования служила венозная кровь матери и со-скоб из ротовой полости новорожденных. Выделение ДНК из образцов крови проводилось с использованием набора «ДНК-сорб» (ЦНИИ Эпидемиологии МЗ, РФ) строго в соответствии с протоколом. Выделенные образцы хранились при температуре минус 70 °C. Определение генетического полиморфизма -308 G/A в гене TNF-a с проводили с использованием метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Реакционную смесь готовили из реактивов «Набора для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I» (Синтол, РФ) согласно рекомендациям фирмы-производителя. Системы для оценки данных полиморфных маркеров были отработаны ранее [7]. После приготовления реакционных смесей пробирки помещали в амплификатор для ПЦР-РВ «Rotor-gene» (QIAGEN, Германия) или Pico Real 24 (Thermo Scientific). Управляющая программа приборов строит кривые накопления сигнала образца в каждом из задействованных каналов. Системы для определения полиморфных маркеров в генах TLR9 и DEFB1 использовали технологию TaqMan-зондов.
Статистическая обработка данных проводилась в программе Microsoft Excel 2007, а также с использованием статистического пакета «STATISTICA 6.0». Для статистической обработки результатов по качественным признакам (полиморфным маркерам - сравнение частот аллелей и генотипов) использовали критерий х2 и точный критерий Фишера. Достоверными считались различия при p<0,05. Помимо достоверности различия частот, вычисляли отношение шансов (OR) [8].
Результаты и обсуждение. Сравнительный анализ выявил достоверные различия частот аллелей и генотипов полиморфного маркера A2848G гена TLR9. Аллель А и генотип АА являлись протективными в случае преждевременных родов инфекционного генеза. Аллель А полиморфного маркера A2848G в гене
TLR9 ассоциирован со срочными родами при урогенитальной инфекции и с отсутствием инфекционной патологии у новорожденных (относительный риск - 2,030). Показано, что генотип AG полиморфного маркера G(+2S4S)A в гене TLR9 ассоциирован с риском развития пневмонии у новорожденных. Впрочем, следует отметить, что частота аллелей в группах беременных с УГИ и в контрольной группе составили: аллель G - 0,48 и 0,61, аллель A - 0,52 и 0,39, соответственно.
Исследование полиморфного маркера C(-44)G в нетранслируемой области гена про-тивомикробного пептида - дефенсина DEFB1 не выявило ассоциации с преждевременными родами. Однако, генотип CG C(-44)G ассоциирован с риском развития пневмонии у новорожденных. Генотип AG полиморфного маркера -3GS G/A в гене TNF ассоциирован с пневмонией.
На основании полученных результатов можно заключить, что полиморфные маркеры в генах распознающих рецепторов врожденного иммунитета, противомикробных пептидов и цитокинов значимы при прогнозировании невынашивания беременности и инфекционных осложнений у новорожденных.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Сидельникова В. M., Сухих Г. Т. Невынашивание беременности: руководство для практикующих врачей. M.: MИА, 2010, 536 с.
2. Mакаров О. В., Ковальчук Л. В., Ганковская Л. В., Бахарева И. В., Ганковская О. А. Невынашивание беременности? Инфекция? Врожденный иммунитет. M.: Геотар-Mедиа, 2007, 196 с.
3. Mor G., Cardenas I., Abrahams V., Guller S. Ann N Y Acad Sci. 2011, Mar 1221, 80-7.
4. Svitich O. A., Gankovskaya L. V., Lavrov V. F., Grigo-rieva O. Iu., Karaulov A. V., Zverev V. V. International Trends In Immunology 2014, 2, 62-66.
5. Ганковская О. А. Mедицинская иммунология. 2010,12, 1-2, 87-94.
6. Yaprak Y., Hasibe V., Aysxe T., Ayse C., Aysxe N., Nazmi M., Aylin T., Ali H., Namik O., Fatma B. DNA and cell biology 2012, 31, 1, 92-97.
7. Свитич О. А., Ганковская Л. В., Рахманова И. В., Зайцева И. А., Ганковский В. А. Вестник РГMУ 2012, 3, 59-62.
8. Гланц С. Mедико-биологическая статистика. «Практика». Mосква, 1999.
ASSOCIATION OF GENETIC MARKERS IN THE GENES OF INNATE IMMUNITY WITH PRETERM BIRTH AND NEWBORN INFECTION
Svitich O. A.1, Alieva A. I.2, Rasskazova N. D.1, Semenova E. A.1, Malushenko S. V.3, Gankovskaya L. V.3
'Mechnikov Scientific Research Institute of Vaccines and Serums, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow; 2Dagestan State Medical Academy, Makhachkala; 3Russian State Medical University,
Moscow, Russia
It is known that during pregnancy there is a change of immunological balance in a woman's body that can lead to increased risk of pathology of newborn (pneumonia). The aim of this work was to investigate the association of genetic markers G(+2848)A (gene TLR9), G(-52)A (gene DEFB1) and -308 G/A (gene TNF-a) with the risk of preterm birth and infection pathology of newborns. The association of SNP with pathology was studied by PCR-RT. The following results are obtained: the allele A and genotype AA are associated with normal pregnancy, genotype AG (G (+2848) in TLR9 gene) - with the risk of infection. Genotypes AG (-308 G/A in the gene TNF) and CG C(-44)G are associated with the development of intrauterine infection of the fetus.
Key words: innate immunity, pathology of the fetus, polymorphic markers
ПОДБОР МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ ИЗ КУЛЬТУРЫ LACTOBACILLUS PLANTARUM 8PA-3
Соболева А. В., Колобов А. А., Красовская И. Е., Гришина Т. В.
ФГБОУ ВПО «(Санкт-Петербургский государственный университет», биологический факультет, кафедра биохимии, лаборатория внутриклеточной регуляции,
Санкт-Петербург, Россия
Антимикробные пептиды экстрагировали из культуры L. plantarum 8PA-3. Использование методов М. Мота-Мейры и С. Д. Тодорова позволило выделить из культуры L. plantarum 8PA-3 обогащённые фракции низкомолекулярных катионных белков и пептидов с молекулярной массой в диапазоне от 1 до 10 кДа, обладающие разной антимикробной активностью по отношению к тестовым культурам.
Ключевые слова: пробиотические бактерии, лактобактерии, антимикробные пептиды, бактериоцины, плантарицины
Введение. Профилактика и терапия заболеваний, вызываемых патогенными микроорганизмами, являются важнейшими задачами современной медицины и иммунологии. Проблема устойчивости к антибиотикам бактерий делает актуальными поиск и разработку новых лекарственных средств, которые могли бы стать заменой или дополнением конвен-циальным антибиотикам. В качестве одного из перспективных источников антибиотиков нового поколения можно рассматривать бак-
териоцины - антимикробные белки и пептиды бактериального происхождения, играющие важную роль в антагонистической активности бактерий. Особый научный и практический интерес в этой связи представляют бактерии, входящие в состав нормальной микробиоты человека, в частности, пробиотические молочнокислые бактерии. В настоящей работе объектом исследования стал штамм Lactobacillus plantarum 8РА-3, который уже более 40 лет исп
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.