научный журнал по химии Биохимия ISSN: 0320-9725

Архив научных статейиз журнала «Биохимия»

  • УБИКВИТИН-ПРОТЕИНЛИГАЗА ПАРКИН: РОЛЬ В РАЗВИТИИ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА

    БУНЕЕВА О.А., МЕДВЕДЕВ А.Е. — 2006 г.

    Паркин — белок, кодируемый одноименным геном и обладающий убиквитин-протеинлигазной активностью. В настоящем обзоре рассмотрены доменная структура, субстратная специфичность, субклеточная локализация и механизмы регуляции активности паркина. Проанализированы данные по влиянию различных мутаций гена паркина на структуру и функции этого белка, а также результаты экспериментов in vivo с мутантными по гену паркина животными. Более полное понимание особенностей биохимии паркина и его компартментализации позволят разработать новые подходы в терапии как наследственных, так и спорадических случаев болезни Паркинсона.

  • УГЛЕВОДСОДЕРЖАЩИЕ ПОЛИМЕРЫ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ СТРЕПТОМИЦЕТА-ТЕРМОФИЛА STREPTOMYCES THERMOVIOLACEUS SUBSP. THERMOVIOLACEUS BKM AC-1857T

    ЕВТУШЕНКО Л.И., КОЗЛОВА Ю.И., СЕНЧЕНКОВА С.Н., СТРЕШИНСКАЯ Г.М., ШАШКОВ А.С. — 2006 г.

    Исследованы анионные полимеры клеточной поверхности у стрептомицета-термофила. Обнаружено, что , клеточная стенка Streptomyces thermoviolaceus subsp. thermoviolaceus BKM Ac-1857T содержит полимеры, различные по структуре: 1,3-поли(глицерофосфат), дисахарид-1-фосфатный полимер с повторяющимся звеном -6)-a-Galp-(l-6)-a-GlcpNAc-P- и полисахарид без фосфора с повторяющейся единицей ->6)-а-GalpNAc-(l->3)-p-GalpNAc-(l->. В клеточной стенке прокариот впервые описаны установленные структу- ры дисахарид-1-фосфатного полимера и полисахарида, не содержащего фосфора.

  • УСКОРЕНИЕ АГРЕГАЦИИ БЕЛКОВ В УСЛОВИЯХ ТЕПЛОВОГО СТРЕССА ПОД ВЛИЯНИЕМ ФАКТОРА ИНГИБИРОВАНИЯ МИГРАЦИИ МАКРОФАГОВ

    ГУРВИЦ Б.Я., ЕРОНИНА Т.Б., ЛЮТОВА Е.М., ЧЕРЕПКОВА О.А. — 2006 г.

    Исследовано влияние термостабильного гидрофобного белка (12,5 кДа) - фактора ингибирования миграции макрофагов (Macrophage migration inhibitory factor, MIF) на кинетику агрегации модельных белковых субстратов (гликогенфосфорилазы b из скелетных мышц кролика и дрожжевой алкогольдегидрогеназы) в условиях теплового стресса (41-48°). С использованием турбидиметрического метода впервые обнаружена антишаперонная активность MIF, проявляющаяся в значительном ускорении агрегации белков и увеличении предельного значения кажущегося поглощения при 360 нм при t → ∞ в субстехиометрическом диапазоне концентраций MIF; показан кооперативный характер кинетики агрегации. На примере агрегации алкогольдегидрогеназы при температуре, близкой к физиологическому уровню (41,5°), продемонстрирована возможность обратимости процесса агрегации после снятия денатурирующего воздействия, обусловленная растворимостью агрегатов и стабилизацией олигомерной структуры субстрата в результате связывания MIF с частично денатурированным белком. Предположено, что, несмотря на выраженный антишаперонный эффект, в случае снятия теплового стресса и возврата системы к нормальному состоянию, MIF может играть шапероноподобную роль.

  • УЧАСТИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ВО ВЗАИМОДЕЙСТВИИ РАСТЕНИЙ С ФИТОПАТОГЕННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ

    ВАЛУЕВА Т.А., МОСОЛОВ В.В. — 2006 г.

    Рассмотрены различные формы участия протеолитических ферментов в патогенезе и защите растений. Наряду с внеклеточными протеиназами, фитопатогенные микроорганизмы продуцируют специфические эффекторы, обладающие протеолитической активностью и способные действовать на белки внутри растительной клетки. В свою очередь, растения для защиты от патогенных микроорганизмов используют как внеклеточные, так и внутриклеточные протеиназы. Среди последних особая роль принадлежит вакуолярным процессирующим ферментам (легумаинам), которые выполняют функции каспаз в растительной клетке.

  • УЧАСТКИ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С МАТРИКСОМ (СКАФФОЛДОМ), И ВНУТРЕННИЕ ИЗГИБЫ ДНК (ОБЗОР)

    ГУВЕЙЯ Ф.С., ФЕРНАНДЕС М.А., ФИОРИНИ А. — 2006 г.

    Согласно последним данным не выявлено консенсусной нуклеотидной последовательности, характерной для всех участков ДНК, ассоциированных с ядерным матриксом (скаффолдом) (S/MARs). Отсутствие характерного для всех S/MARs мотива в сочетании с данными о некоторых S/MARs, не ассоциированных с определенными последовательностями ДНК, свидетельствует о роли структурных элементов, таких как изгибы оси ДНК, в организации хроматина и в эффективности его связывания с белками. Как и участки ДНК, содержащие внутренние изгибы, S/MARs локализованы близко к промоторам, точкам начала репликации и сайтам расщепления. Структура хроматина этих регуляторных областей важна для организации хромосом и аккуратной регуляции ядерных процессов. Рассматривается биологическое значение совместной локализации S/MARs и участков ДНК, содержащих изгибы цепи.

  • ФАКТОР ИНГИБИРОВАНИЯ МИГРАЦИИ МАКРОФАГОВ: ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ МОЗГА БЫКА

    ГУРВИЦ Б.Я., ЛЮТОВА Е.М., ЧЕРЕПКОВА О.А. — 2006 г.

    В статье приведены методы очистки и частичная характеристика фактора ингибирования миграции макрофагов (Macrophage migration inhibitory factor, MIF) из цитозоля мозга быка. Разработан быстрый и сравнительно простой способ выделения, основанный главным образом на эксклюзионной хроматографии на полимере TSK Toyopearl, сорбционные свойства которого позволяют выделять MIF с запаздыванием по отношению к элюированию других белков с аналогичной молекулярной массой. Показано, что с помощью данного метода можно получать MIF с высоким выходом (0,1 мг гомогенного белка на 1 г сырой ткани). Идентичность выделенного белка MIF подтверждена с помощью электрофореза в присутствии Ds-Na, иммуно-блоттинга, секвенирования N-концевой последовательности аминокислотных остатков, а также на основании определения присущей MIF кето-енолтаутомеразной активности с использованием р-гидроксифенил-пирувата в качестве субстрата.

  • ФАЛЬШИВАЯ НОТА ДНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ЙОТА В АНСАМБЛЕ СТОРОЖЕЙ ГЕНОМА МЛЕКОПИТАЮЩИХ

    ГЕНИНГ Л.В., МАКАРОВА А.В., МАЛАШЕНКО A.M., ТАРАНТУЛ В.З. — 2006 г.

    ДНК-полимераза йота (Poll) млекопитающих является одним из членов Y семейства ДНК-полимераз. Эти ферменты в числе многих других ферментов-«сторожей генома» отвечают за поддержание его стабильности. Они участвуют в преодолении определенных типов повреждении ДНК и характеризуются низкой точностью включения оснований в ДНК. Уникальное свойство Рок включать преимущественно G напротив Т матрицы позволило нам идентифицировать продукт этого фермента среди продуктов синтеза всех остальных ДНК-полимераз. Такой продукт можно назвать «фальшивой нотой» ДНК-полимеразы йота. Мы определяли ферментативную активность Рок в грубых экстрактах клеток различных органов инбредных линий мышей СЗН/Sn, 101/Н, C57BL/6, BALB/c 129/J, отличающихся по ряду параметров. Относительно высокая интенсивность «звучания» фальшивой ноты Рок была обнаружена только в экстрактах клеток семенников и головного мозга у мышей линий (СЗН/Sn, 101/Н, C57BL/6 и BALB/C ). У мышей линии 129/J, содержащих нонсенс-мутацию во втором экзоне гена рок, ферментативная активность Рок была достоверно обнаружена только в экстрактах клеток головного мозга. Полученные данные показывают, что даже при наличии нонсенс-мутации в гене рок активный фермент может образовываться в отдельных типах клеток. Это подтверждает вывод о тканеспецифичной регуляции экспрессии гена рок, которая осуществляется за счет альтернативного сплайсинга. Полуколичественная оценка активности Рок в разных линиях мышей, отличающихся по радиочувствительности, свидетельствует о наличии обратной зависимости между ферментативной активностью Рок в семенниках и их устойчивостью к радиационному облучению.

  • ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ БАКТЕРИЙ RHODOPSEUDOMONAS PALUSTRIS ШТАММ F8PT

    ЕПРИНЦЕВ А.Т., КЛИМОВА М.А., КОМПАНЦЕВА Е.И., ФАЛАЛЕЕВА М.И. — 2006 г.

    Из Rhodopseudomonas palustris штамм f8pt получены электрофоретически гомогенные изоформы малатдегид- рогеназы с разной четвертичной структурой, экспрессируемые при фотолитогетеротрофном росте на мала- те и ацетате. Методом избирательного ингибирования цикла трикарбоновых кислот или глиоксилатного цикла показано, что димерная форма фермента обеспечивает функционирование цикла Кребса, а тетрамер- ная участвует в работе глиоксилатного цикла.

  • ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК DSRED: ПАРАМЕТРИЗАЦИЯ ХРОМОФОРА КАК АМИНОКИСЛОТНОГО ОСТАТКА ДЛЯ КОМПЬЮТЕРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ В РАМКАХ СИЛОВОГО ПОЛЯ OPLS-AA

    ВРЖЕЩ Е.П., ВРЖЕЩ П.В., ДМИТРИЕНКО Д.В., ДРУЦА B.Л. — 2006 г.

    A topology of the neutral chromophore of the fluorescent protein DsRed as a residue of [(4Z)-2-[(lZ)-4-amino-4oxobutanimidoyl]-4-(4-hydroxybenzylidene)-5-oxo-4,5-dmydro-lH-imidazol-l-yl]acetic acid was calculated for molecular dynamics simulations in the OPLS-AA force field. The chromophore parameters were obtained using ab initio (RHF/6-31G**) quantum chemical calculations applying density functional theory (B3LYP). The molecular dynamics trajectory of tetrameric DsRed in solution was calculated (300 K, 4 ns) using the obtained topology. Comparison of the quantitative characteristics of the chromophore structure obtained as a result of molecular dynam- ics simulation of DsRed with the quantitative characteristics of the chromophore based on the crystallographic X-ray data of DsRed (PDB ID: 1ZGO, 1G7K, and 1GGX) and with the quantitative characteristics of the chromophore obtained as a result of quantum mechanics calculations demonstrated the accuracy of the developed chromophore parametrization. The extended force field OPLS-AA/DsRed was acquired by including this chromophore topology into the OPLS-AA force field. This force field can be used to perform molecular dynamics calculations of proteins containing the DsRed chromophore. The presented parameter set can be applied to describe the chromophore in any other force field.

  • ХАРАКТЕРИСТИКА КАТАЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ГИДРОГЕНАЗЫ, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ ОДНОКЛЕТОЧНОЙ ЦИАНОБАКТЕРИИ GLOEOCAPSA ALPICOLA CALU 743

    СЕРЕБРЯКОВА Л.Т., ШЕРЕМЕТЬЕВА М.Е. — 2006 г.

    Изучены основные каталитические свойства гидрогеназы типа Нох, выделенной из клеток Gloeocapsa alpicola. Фермент эффективно катализирует реакции окисления и образования Н2 в присутствии метилвиоло-гена (MB) и бензилвиологена (БВ). Скорости этих реакций при взаимодействии с физиологическим донором/акцептором электронов, NADH/NAD*, составляют лишь 3-8% от МВ(БВ)-зависимых значений. Фермент взаимодействует с NADP+ и NADPH, но более специфичен к NAD+ и NADH. Установлено, что очистка гидрогеназы сопровождается разрушением ее мультимерной структуры и утратой способности взаимодействовать с пиридиннуклеотидами при сохранении активности гидрогеназного компонента (HoxYH). Для проявления каталитической активности фермент нуждается в восстановительной активации, которая осуществляется в присутствии Н2, причем NADH ускоряет этот процесс. Показано, что конечный уровень активности гидрогеназы зависит от редокс-потенциала активационной среды (Eh). При рН 7,0 активность в реакции МВ-зависимого окисления Н2 увеличивалась по мере снижения Eh от -350 мВ и достигала максимума при Еh около -390 мВ. В то же время скорость окисления Н2 в присутствии NAD+ в исследуемом диапазоне Eh оставалась практически постоянной и составляла 7-8% от максимальной скорости окисления Н2 в присутствии МВ.

  • ЦИТОТОКСИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ ПОЛИСАХАРИДОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВОДОРОСЛЕЙ, НА HL60 КЛЕТКИ

    АОЯМА X., АССИС К., КУЭРОЗ К., ЛЕТЕ Е., МЕДЕЙРОС В., РОША X., ФЕРРЕЙРА К. — 2006 г.

    Целью данного исследования было изучение цитотоксического влияния на клетки HL60 трех различных классов полисахаридов из водорослей. Среди полисахаридов галактофуканы, фукоидан и глюкан. Жизнеспособность клеток оценивали по реакции с участием МТТ, содержанию белка и фосфатазной активности. Показано повышение фосфатазной активности и содержания белка, связывание МТТ в присутствии трех типов галактофуканов (1, 2 и 3), имеющих молекулярные массы 1600, 1200 и 360 кДа соответственно. Однако, в присутствии галактофукана 3 общее количество белка не менялось. При равных экспериментальных условиях с другими галактофуканами для галактофукана 3 наблюдалось резкое повышение фосфатазной активности. Усиление функции митохондрий наблюдалось у клеток, находящихся в контакте с галактофука-ном 1. Фукоидан не оказывал существенного влияния на связывание МТТ, однако приводил к понижению содержания белка (IС50 около 30 мкг/мл). Глюкан также способствовал активации всех вышеуказанных параметров, особенно фосфатазной активности и содержания белка. Данная работа содержит новые знания о цитотоксическом действии полисахаридов на клетки HL60, а также предпосылки о роли фосфатазы в данном процессе.

  • ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ АМИЛОИДНЫХ ОЛИГОМЕРОВ ЛИЗОЦИМА: ЧАСТНЫЙ СЛУЧАЙ ИЛИ ОБЩЕЕ ПРАВИЛО ДЛЯ АМИЛОИДНЫХ СТРУКТУР?

    ГАРИБЯН А., ДАРИНСКАС А., ЗАМОТИН В.В., КОСТАНЯН И.А., МАЛИШАУСКАС М., МОРОЗОВА-РОШ Л.А. — 2006 г.

    Исследованы молекулярные механизмы цитотоксичности амилоидных структур лизоцима из молока лошади. Показано, что лизоцим образует растворимые амилоидные олигомеры и протофибриллы в ходе инкубации при 57° и при рН 2,0 и 4,5. Эти структуры связывают амилоидные красители тиофлавин Т и конго красный, морфология и размеры которых были проанализированы с помощью атомной силовой микроскопии. Установлено, что мономерный лизоцим и его фибриллярные структуры не влияли на выживаемость трех типов клеток, используемых в наших экспериментах (в частности, первичных нейронов, первичных фиб-робластов мыши и клеток линии нейробластомы IMR-32). Однако растворимые амилоидные олигомеры лизоцима вызывали гибель всех клеточных культур, о чем свидетельствовало окрашивание клеток с помощью бромистого этидия. При этом первичные культуры клеток оказались более чувствительными к действию амилоида, чем клетки линии 1MR-32. Отмечено, что цитотоксичность амилоида зависела от размеров олигомерных частиц: растворы, содержавшие 20-меры, образованные при рН 4,5, были более токсичны, чем тетрамеры и октамеры, наблюдаемые в растворе при рН 2,0. Показано, что растворимые амилоидные олигомеры способны собираться в кольца, однако корреляции между числом колец в образце и его токсичностью не наблюдалось. Факт цитотоксичности промежуточных олигомеров такого распространенного белка, как лизоцим, подтверждает гипотезу, что цитотоксичность является общей чертой белкового амилоида. Предотвращение образования промежуточных олигомерных форм, таким образом, является ключевым моментом в предупреждении амилоидных патогенезов.

  • ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ БЕЛКОВ МЕМБРАНЫ ВКЛЮЧЕНИЯ INCB И INCC. CHLAMYDIA TRACHOMATIS В ESCHERICHIA COLI

    АКОПИАН Т.А., ГОВОРУН В.М., КОСТРЮКОВА Е.С., ЛАЗАРЕВ В.Н., ЛЕВИЦКИЙ С.А., ТИТОВА Г.А. — 2006 г.

    Проведено клонирование генов, кодирующих белки мембраны включения IncB и IncC Chlamydia trachomatis в плазмидные векторы серии рЕТ для дальнейшего получения рекомбинантных белков. В результате получены рекомбинантные IncB и IncC C. trachomatis, которые могут быть использованы для последующего антителогенеза и для выявления белков-партнеров в реакциях белок-белкового взаимодействия.

  • ЭКСПРЕССИЯ ЦИТОХРОМА B5 ВНЕШНЕЙ МЕМБРАНЫ МИТОХОНДРИЙ В ESCHERICHIA COLI. ВЫДЕЛЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ГЕМОПРОТЕИДА И ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С БЕЛКАМИ-ПАРТНЕРАМИ

    ГИЛЕП А.А., СЕРГЕЕВ Г.В., УСАНОВ С.А., ЭСТАБРУК Р.У. — 2006 г.

    Приведены результаты экспрессии в Escherichia coli и выделении полноразмерной формы рекомбинантного цитохрома b5 внешней мембраны митохондрий, а также характеристика этой формы. Оптимизацией условий экспрессии цитохрома b5 внешней митохондриальной мембраны достигаут уровень экспрессии вплоть до 104 нмоль гемопротеида на 1 л культуры. Рекомбинантный цитохром b5 внешней митохондриальной мембраны выделен и очищен из солюбилизата клеточных мембран с помощью металлоаффинной хроматографии, обладает физико-химическими, спектральными и иммунохимическими свойствами цитохрома b5 внешней митохондриальной мембраны крысы. Иммобилизованный рекомбинантный цитохром b5 внешней митохондриальной мембраны использован в качестве аффинного лиганда для хроматографии элект- рон-транспортных белков. Показано, что при взаимодействии NADPH : цитохром Р450-редуктазы и изо-форм цитохрома b5 важную роль играют гидрофобные контакты между белками, хотя вклад этих взаимодействий в комплексообразование NADPH : цитохром Р450-редуктазы с изоформами цитохрома b5 различен.

  • ЭКСПРЕССИЯ ЦИТОХРОМА P450SCC В КЛЕТКАХ ESCHERICHIA COLI: ВНУТРИКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ РЕДОКС-БЕЛКАМИ

    ВИНОГРАДОВА А.А., ЛУЗИКОВ В.Н., НОВИКОВА Л.А., РАДЮК В.Г., ФАЛЕРТОВ Я.В., ШКУМАТОВ В.М. — 2006 г.

    Escherichia coli cells producing the mature form of adrenal cytochrome P450scc were used as a model for study of cytochrome P450scc topogenesis. By disruption of transformed E. coli cells and centrifugation of the homogenate under conventional conditions, we obtained membrane and soluble (high-speed supernatant) fractions both containing the recombinant protein. Gel-permeation high performance liquid chromatography showed that in the highspeed supernatant the native cytochrome P450scc exists exclusively as a component of membrane fragments exceeding 400 kD. These data supported by kinetic assays suggest that the >400-kD particles containing P450scc are some lipoprotein associates. In total, we failed to detect a genuine soluble cytochrome P450scc in the E. coli cells, which suggests that membrane insertion is an obligatory stage of holoenzyme formation. In the high-speed supernatant supplemented with NADPH, cytochrome P450scc underwent one-electron reduction and could convert 22R-hydroxy-cholesterol into pregnenolone. Thus, we have for the first time observed functional coupling of cytochrome P450scc with the bacterial electron transfer system.

  • ЭТИЛЕНГЛИКОЛЬ И ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТЬ ТРИПСИНА В СИСТЕМЕ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ

    ВЫЛЕГЖАНИНА Н.Н., ЗУЕВ Ю.Ф., СТУПИШИНА Е.А., ФАЙЗУЛЛИН Д.А., ХАМИДУЛЛИН Р.Н. — 2006 г.

    Изучена температурная зависимость действия этиленгликоля (ЭГ) на кинетику реакции гидролиза N-a-бензоил-L-аргинин-этилового эфира, катализируемую трипсином, включенным в обращенные мицеллы на основе бис-(2-этилгексил)-сульфосукцината натрия (АОТ). Показано, что ЭГ расширяет диапазон активности трипсина в обращенных мицеллах в сторону более высоких температур. Данные ИК-спектроскопии свидетельствуют о стабилизирующем влиянии ЭГ в системе обращенных мицелл на вторичную структуру белка. Методом ЭПР спиновых зондов установлено, что солюбилизированный белок провоцирует изменения во взаимодействии ЭГ с полярными головными группами АОТ и вызывает изменение жесткости ми-целлярной матрицы. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что в микроэмульсионных средах ЭГ может повышать термостабильность солюбилизированного фермента по двум механизмам.

  • ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ ВЕКТОРЫ И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ, ДЛЯ ТЕРАПИИ РАКА (ОБЗОР)

    ГЛИНКА Е.M., ДЕЕВ С.М., ЭДЕЛЬВЕЙС Э.Ф. — 2006 г.

    Рассмотрены способы придания специфичности терапевтическим антираковым агентам: транскрипцион ная активация ткане- и опухолеспецифичных промоторов в эукариотических экспрессирующих векторах и использование противоопухолевых иммуноконъюгатов. Проанализирована стратегия выбора адресно- транскрибируемых промоторов и приведены примеры слитных иммунобелков для антираковой терапии. Изложены имеющиеся в литературе данные нового направления, объединяющего методы генотерапии и те рапии с использованием антител. Это направление основано на создании векторов, экспрессирующих сек- ретируемые иммуноконъюгаты. После введения вектора в клетку, она способна синтезировать и секретиро- вать слитный белок, содержащий терапевтический антираковый агент и антитело, придающее специфичес кую направленность слитного белка к раковым клеткам.

  • «ХИТИН-СПЕЦИФИЧНЫЕ» ПЕРОКСИДАЗЫ В РАСТЕНИЯХ

    МАКСИМОВ И.В., ХАЙРУЛЛИН Р.М., ЧЕРЕПАНОВА Е.А. — 2003 г.

    Изучали способность пероксидазы из проростков различных видов растений связываться с хитином. В присутствии хитина происходит повышение пероксидазной активности в растительном экстракте, причем у одних видов активируются пероксидазы во фракции, не сорбирующейся на хитин, а у других — во фракции, связывающейся с ним. Показано, что у овса посевного (Avena sativa), риса культурного (Orysa satпа), хрена деревенского (Armoracia rusticana), редиса посевного (Raphanus sativus var. radimla), арахиса подземного (Arachis hypogaea), табака (Nicotiana tabacum) с хитином связываются анионные изопероксидазы. У гороха посевного (Pisum sativum), козлятника восточного (Galega orientais), огурца посевного (Cucumis sativus), цукини (Cucurbitapepo L.) кроме анионных изопероксидаз сорбируются и катионные. Сравнивается активация пероксидаз под влиянием хитина с процессами, происходящими при сверхчувствительной реакции и лигнификации точек проникновения гриба при патогенезе. Высказываются предположения о роли «хитин-специфичных» изопероксидаз в ингибировании роста фитопатогенных грибов и о связи этого явления со структурными особенностями отдельных изопероксидаз

  • АКТИВАЦИЯ ГУАНОЗИН-5'-3-0-(ТИО)ТРИФОСФАТОМ ИНДУЦИРУЕТ ДЕЗАГРЕГАЦИЮ А-СУБЪЕДИНИЦЫ GO-БЕЛКА

    ЖАНГ Л., ХУАНГ Ю., ЯНГ Ш. — 2003 г.

    Миристилированную α-субъединицу G-белка (G Oα) экспрессировали в штамме JM109 клеток Escherichia coli, котрансформированном плазмидами pQE60 (G Oα) и pBB131 (N-миристоилтрансфераза, NMT). По данным гель-электрофореза в неденатурирующих условиях и гель-фильтрации, высокоочищенная G Oα в связанном с GDP состоянии может образовывать ди-, три-, тетра-, пента- и гексамерные олигомеры. Активация гуанозин-5'-3-O-(тио)трифосфатом (GTPγS) индуцирует дезагрегацию олигомерных форм G Oα до мономеров. При обработке G Oα сшивающим агентом N, N'-1,4-фенилендималеимидом (p-PDM) регистрировали образование множественных поперечно-сшитых продуктов, которое не происходило в случае предварительной обработки белка GTPγS. Иммуноблоттинг также выявил факт олигомеризации очищенной G Oα и ее дезагрегацию под действием GTPγS. Эти результаты являются прямым подтверждением теории «дезагрегации-сопряжения». Дезагрегирующий эффект GTPγS позволяет установить регуляторную роль обмена GDP на GTP в механизмах сигнальной трансдукции, сопряженных с G-белками.

  • АКТИВАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗНОГО ОКИСЛЕНИЯ АРОМАТИЧЕСКИХ АМИНОВ 2-АМИНОТИАЗОЛОМ И МЕЛАМИНОМ

    КАРАСЕВА Е.И., МЕТЕЛИЦА Д.И., НАУМЧИК И.В. — 2003 г.

    Пероксидазное окисление 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМБ), орто-фенилендиамина (ФДА) и 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) существенно ускоряется в присутствии 2-аминотиазола (АТ) и меламина (МА), с увеличением концентрации которых симбатно возрастают величины k cat и K m для ТМБ и ФДА. В качестве количественной характеристики активации пероксидазного окисления ТМБ и ФДА использован коэффициент (степень) α (М —1), который существенно зависит от рН в интервале 6,2—6,4 для пары ТМБ—АТ, 6,4-7,4 для ТМБ—МА и 6,0—7,4 для ФДА—МА. Увеличение коэффициента α с ростом рН подтверждает нуклеофильную природу активации пероксидазного окисления ароматических аминов в присутствии АТ и МА. В оптимальных условиях коэффициенты α для пар ТМБ—АТ, ФДА—АТ, ТМБ—МА и ФДА—МА меняются в пределах (1,90—3,53) • 10 3 М —1.