РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2013, том 7(16), № 4, с. 391-402
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ У БОЛЬНЫХ РАЗЛИЧНЫМИ КЛИНИЧЕСКИМИ ФОРМАМИ ЭРИТЕМ И ДИНАМИКА В ХОДЕ ИММУНОТЕРАПИИ
© 2013 г. Е.В. Сорокина, В.Г. Хоменков, Э.А. Ахматов, Н.П. Уткина, Н.К. Ахматова
ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» РАМН, Москва, Россия Поступила: 23.04.2013. Принята: 30.07.2013
Под нашим наблюдением находились 106 взрослых пациентов с эритемами (14 больных кольцевидной центробежной эритемой Дарье (ЭКЦ), 51 больной многоформной экссуда-тивной эритемой (МЭЭ) и 41 больной фиксированной эритемой (ФЭ)). У всех больных в начале исследования и после лечения определяли уровень цитокинов в сыворотке крови и внутриклеточно методом твердофазного ИФА. У больных ЭКЦ лечение иммуновак способствовало достоверному (р < 0,05) повышению уровня сывороточного №Ы-у, 1Ь-2. В то время как кагоцел приводил к повышению 1Ь-5 (р > 0,05). Различия интенсивности влияния терапии на динамику уровней сывороточных цитокинов наиболее выражены в отношении ШЫ-у: иммуновак обладал наиболее высокой активностью к индукции данного цитокина. У больных МЭЭ лечение иммуновак способствовало достоверному (р < 0,05) повышению уровня сывороточного ШЫ-у, незначительному (р > 0,05) повышению 1Ь-ф и снижению 1Ь-17. В то время как кагоцел приводил к повышению 1Ь-4 (р > 0,05), 1Ь-2, 1БЫ-у (р < 0,05) и снижению ТСБ-р и 1Ь-12 (р < 0,05). У больных ФЭ лечение иммуновак-ВП-4 способствовало достоверному (р < 0,05) повышению уровня сывороточного 1БЫ-у, 1Ь-1р, 1Ь-6. В то время как кагоцел приводил к повышению №Ы-у (р < 0,05), 1Ь-1р, 1Ь-6 и снижению ТСБ-р (р < 0,05). При этом у обследованных больных базисная терапия способствовала достоверному повышению ТСБ-р. Включение в комплекс терапевтических и профилактических мероприятий у больных эритемами иммуномодуляторов способствует активации звеньев врожденного и запускает механизмы адаптивного иммунитета, способствуя тем самым усилению противовирусного ответа.
Ключевые слова: кольцевидная центробежная эритема, многоформная эритема, фиксированная эритема, цитокины, иммуновак, кагоцел, флакозид
ВВЕДЕНИЕ
Ведущую роль в этиопатогенезе эритем играют инфекционные агенты, часто вирусной природы, формируя инфекционно-аллергический генез заболевания [1 — 5]. К группе эритем с мало изученным патогенезом относят эритему мигрирующую Аф-целиуса — Липшутца (erythema migrans), многоформную экссудативную эритему (erythema multiforme), эритему кольцевидную центробежную Дарье (erythema annulare centrifugum), стойкую дисхромическую эритему (Erythema dyschromicum), эритему воз-
Адрес: 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5а. E-mail: sorokina-cathrine@rambler.ru
вышающуюся стойкую (erythema elevatum diutinum) [6].
В первой линии защиты от всех антигенно-чужеродных соединений участвуют эпителиальные клетки, макрофаги, дендритные клетки, гранулоциты, тучные клетки, NK-клетки и др., которые служат мостиком между пато-ген-ассоциироваными молекулярными структурами (PAMPs) и антиген-специфическими клетками адаптивного иммунного ответа, транслируют сигналы специфических наследственно закодированных рецепторов (PRRs) в растворимые медиаторы, которые связываются с Т- и В-клетками через специфические цитокин/хемокиновые рецепторы. Одним из ключевых по значимости событий является синтез комплекса провоспалительных цито-
кинов, стимулирующих большинство этапов воспаления и обеспечивающих активацию различных типов клеток, участвующих в поддержании и регуляции воспаления. В норме цитокины практически не попадают в системную циркуляцию и действуют локально в тканях в месте их выработки. Посредством цитокинов в первую очередь система лим-фоцитарного иммунитета сращена с другими биологическими системами резистентности к инфекциям и со всем организмом в целом.
Кожа, являясь частью периферического отдела иммунной системы, отличается от типичных лимфоидных органов. В покое её иммунологическая активность минимальна; в ней отсутствует полный набор компонентов для развития полноценного иммунного ответа. В норме кожа становится местом реализации эфферентного звена иммунных процессов только в период внедрений внешних агентов, несущих чужеродные АГ, через повреждённую кожу. При активации повреждающими факторами и микробными продуктами расширяется спектр иммунологически активных клеток кожи (таковыми становятся кератиноциты). При этом участие иммунных механизмов обычно бывает ограниченным, и реакции на подобные внедрения сводятся к локальному воспалению. Благодаря включению процессов миграции клеток, формируется функциональный комплекс, включающий эпидермис, дерму и региональные лимфатические узлы, который обеспечивает развитие иммунного ответа. Восприятие антигенного сигнала происходит в эпидермисе, индуктивные механизмы клеточного ответа реализуются в лимфатическом узле, а эффекторная фаза реакции вновь развертывается в коже. Развитие полномасштабного иммунного процесса в коже с массовой активацией клеток, привлечением лимфоцитов, выделением ци-токинов, формированием морфологических структур типа гранулём является проявлением патологии [7]. Чаще всего она проявляется в виде иммунной гиперреактивности — при аллергических процессах гуморального или клеточного типов, аутоиммунных заболеваниях и других формах кожной патологии. Накоплен большой опыт, свидетельствующий о том, что провоспалительные цитокины усиливают иммунный ответ и способствуют формированию неспецифической резистентности к инфекциям, вызываемым широким кругом патогенов.
Оценка содержания цитокинов в биологических жидкостях и изучение их продукции клетками позволяет лучше оценить состояние иммунной системы организма: получить информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных клеток, о тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и прогнозе, соотношении процессов активации Т-хелпе-ров 1 и 2 типа, что важно для дифференциальной диагностики инфекционных и иммунопатологических процессов, о стадии развития ряда аллергических и аутоиммунных заболеваний [8].
Целью нашего исследования явился поиск и изучение триггерных или пусковых факторов в развитии кольцевидной эритемы Дарье (ЭКЦ), многоформной экссудативной эритемы (МЭЭ) и фиксированной эритемы (ФЭ), а также изучение особенностей цитокиново-го профиля и динамики этих показателей у этих больных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Определение уровня цитокинов в сыворотках/плазме крови больных проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем фирмы «Biosource» (Австрия) согласно инструкции производителя.
Определение уровня внутриклеточных цитокинов
Культуру МЛ инкубировали 24 часа в ростовой среде RPMI-1640 или RPMI-1640 + ФГА (5 мкг/мл), затем исследовали спонтанную и индуцированную продукцию цитокинов в су-пернатантах МЛ. Уровень цитокинов определяли при помощи тест-системы FlowCytomix Human Thl/Th2 11 plex с использованием шариков, сенсибилизированных моноклональ-ными антителами к цитокинам (GM-CSF, IFN-y, IL-1p, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-a), производства BenderMedSystems (Австрия). Уровень цитокинов определяли согласно инструкции производителя с использованием проточного цитометра FC-500 (Beckman Culter, США).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Под нашим наблюдением находилось 14 больных ЭКЦ, женщин — 8, мужчин — 6, в возрасте от 14 до 52 лет. В роли триггерных
факторов у 9 больных выступала реактивация ВЭБ-инфекции, у 3-х — ассоциация ВЭБ и ВГЧ-6 типа. МЭЭ наблюдалась у 51 больного, 32 мужчин и 19 женщин, преимущественно молодого и среднего возраста. Инфекционно-аллергическая, герпес-ассоциированная многоформная эритема наблюдалась у 42 больных. Под наблюдением находился 41 больной ФЭ, из них мужчин — 18, женщин — 23, в возрасте от 25 до 65 лет. При анализе анамнестических данных выявлено, что триггер-ным фактором для первичной манифестации и рецидивов ФЭ являлся прием медикаментов у 37 больных. Обострение герпесвирус-ной инфекции, вызванной ВПГ 1,2, наблюдалось у 14 больных, опоясывающий герпес — у 3 больных. Идентификация вирусов семейства Herpesviridae отмечена у 33 больных ФЭ.
При изучении цитокинового профиля у больных ЭКЦ в сыворотке крови исходно наблюдалось достоверное снижение уровня провоспалительного цитокина IL-2, а также противовоспалительных TGF-ß и IL-10 на фоне повышения уровня провоспалительного IL-1 ß и регуляторных IL-12 и IFN-y по сравнению с группой здоровых лиц (табл. 1).
При исследовании у больных ЭКЦ продукции внутриклеточных цитокинов (табл. 2) МЛПК выявлено, что наиболее высокие уровни экспрессии отмечались в отношении IL-2: число лимфоцитов, синтезирующих IL-2 спонтанно, составило 42%, гранулоцитов — 88,3%, причем из 100% лимфоцитов синтезировали цитокин 53% лимфоцитов с маркером CD8. При этом в ходе индукции ФГА происходило усиление синтеза IL-2 CD8+ лимфоцитами, в то время как гранулоциты снижали секрецию этого цитокина. Число лимфоцитов, спонтанно синтезирующих IL-8, у больных ЭКЦ составило 19,2%, гранулоцитов — 77,9%, причем из 100% лимфоцитов этот цитокин синтезировали 37,8% лимфоцитов с маркером CD16 + . При этом индуцированная продукция IL-8 лимфоцитами, в том числе CD16+ снижалась. TNF-a синтезировали спонтанно 23,5% лимфоцитов, из них 36,7% CD8+ и 7,5% гранулоцитов. Индуцированная продукция TNF-a практически не отличалась от спонтанной, в ходе индукции ФГА незначительно повысился процент цитотоксических лимфоцитов CD8 + , продуцирующих этот цитокин (до 39,3%). В отношении противовоспалительного цитокина IL-4 наблюдалось усиление лимфоцитами индуцированной продукции относительно спонтанной с 5,9 до 18,7%, CD8+ лимфоцитами с
Таблица 1. Уровни цитокинов в сыворотке крови больных эритемой кольцевидной центробежной Дарье до лечения
Цитокины Уровень цитокинов в группе здоровых лиц (пг/мл) Уровень цитоки-нов при эритеме кольцевидной центробежной Дарье (пг/мл)
IL-1ß 12±3,1 14±2*
IL-2 23,5±5,2 16±3
IL-4 11±4,3 11±1
IL-5 14±2,3 11,6±1,7
IL-6 23±5 22±4,8
IL-10 18±7,2* 16,4±2,4
IL-12 7±1,4 16,4±7
IL-17 16,3±3,5 15±1,3
IFN
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.