ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА НЕПРЯМОГО ИФА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА АКТИНОБАЦИЛЛЁЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ
Палазюк С. В.1, Кузьмин В. А.2, Фогель Л. С.2, Кудрявцева А. В.2,
Савенков К. С.2
'ООО «ПсковАгроИнвест», Псковская область, Псковский район, дер. Соловьи;
2ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», Санкт-Петербург, Россия
Актинобациллёзная плевропневмония свиней - высококонтагиозная болезнь, которая регистрируется во многих странах мира с развитым промышленным свиноводством и приносит значительный ущерб. Цель работы - проведение серологического мониторинга методом непрямого ИФА для выявления возрастной динамики специфических антител против АсИпоЪасШш рШешорпеытотае и последующей разработки схемы иммунизации свиней. Установлен неоднородный иммунитет поголовья свиней в хозяйстве ООО «Псков-Агро Инвест» - присутствуют животные с низкими, средними и высокими титрами антител против возбудителя актинобациллезной плевропневмонии свиней. С учётом динамики специфических колостральных антител у поросят подсосного периода необходима иммунизация свиней против актинобациллезной плевропневмонии свиней в возрасте 32-35 дн. с последующей ревакцинацией через 3 нед.
Ключевые слова: антитела, актинобациллёзная плевропневмония свиней, ИФА, токсины
Введение. Актинобациллёзная (актино-бациллярная, гемофилёзная) плевропневмония свиней - высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся развитием геморрагической некротизирующей пневмонии и серозно-фибринозным плевритом преимущественно в каудо-дорсальных областях легких. Роль гемофильных бактерий и актинобацилл в респираторной патологии свиней наиболее отчётливо проявилась в процессе развития и становления промышленного свиноводства. В настоящее время болезнь регистрируется почти во всех странах мира, её появление связывают с интенсификацией свиноводства, расширением международной торговли племенными животными и переводе свиноводства на промышленную основу [1, 2, 3].
В последние годы актинобациллёзная плевропневмония также лидирует и за рубежом среди других болезней свиней по экономическому ущербу [4]. В странах Европейского союза ежегодно расходуется около 1 млрд. € на проведение лечебно-профилактических мероприятий в борьбе с этой болезнью [6].
Болезнь не только приобрела повсеместное распространение и наносит значительный экономический ущерб, но и с большим трудом поддаётся лечению и специфической профилактике [4]. Экономический ущерб зависит от наличия того или иного серотипа возбудителя или их комбинаций. Последнее обстоятельство особенно осложняет диагностику и затрудняет специфическую профилактику болезни.
На сегодняшний день известно 2 биовара (подтипа) А. рШеыгорпеытотае, которые включают 15 серотипов микроорганизма. Все эти серо-типы подразделяются на: высоковирулентные (1, 5, 9, 11, 10, 14), средневирулентные (2, 4, 6, 7, 8, 15 (13), 12) и низко-вирулентные (в основном 3). Патогенность А.рШеыгорпеытотае, патогенез и клиническое проявление болезни обуславливают структурные клеточные элементы и белки, которые также используются при диагностике и иммунопрофилактике заболевания. Одним из наиболее изученных внеклеточных продуктов являются цитолизины (токсины) Арх1, Арх11, и АрхШ. Эти токсины
846
Инфекционная иммунология
являются важнейшим фактором патогенности A. pleuropneumoniae. Токсин Apx IV экспресси-руется в процессе инфицирования животных и. хотя не вызывает патологических изменений, используется для диагностики болезни. При благоприятном развитии инфекционного процесса иммунная система животного вырабатывает специфические антитела, у переболевших свиней вырабатывается антитоксический и антибактериальный иммунитет, который сохраняется несколько месяцев. Первичный иммунный ответ формируется через 8-14 сут. после инфицирования, максимальный уровень антител регистрируют через 4-6 нед. после инфицирования.
Сложность серодиагностики болезни обусловлена вариабельностью антигенных свойств (15 серотипов) Actinobacillus pleuropneumoniae и наличием Арх-токсинов, которые вызывают перекрёстные реакции при проведении серологических исследований [5]. Различные тесты ИФА разработаны на основе полисахаридов или Apx-токсинов. Антитела, циркулирующие в крови, могут быть обнаружены через 1014 дн. после инфицирования, с пиком через 4-6 нед. Специфичность ИФА методов различна, что изначально обусловлено особенностями О-липополисахаридных и К-капсульных антигенов.
В плане совершенствования лабораторной диагностики представляют интерес следующие иммуноферментные тесты: 1) набор ID Screen APP Screening Indirect (ID VET, Франция), который позволяет выявлять специфические антитела против всех известных серотипов возбудителя АППС, 2) набор Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) Antibody Test Kit (APP-ApxIV Ab test, IDEXX, США), позволяющий выявлять специфические антитела к ApxIV-токсину.
Цель работы - проведение серологического мониторинга методом непрямого ИФА для выявления возрастной динамики специфических антител против Actinobacillus pleuropneumoniae и последующей разработки схемы иммунизации свиней.
Методы. Работу проводили на свиноводческом предприятии ООО «ПсковАгроИнвест» в Псковской области. Материалом для исследований служили пробы сывороток крови (n=50) свиней разных возрастов (23, 42, 59, 72, 190-200 дн.) племенного репродуктора ООО «ПсковАгроИнвест». Образцы крови свиней и поросят для лабораторных исследований отбирали из краниальной полой вены в вакуумные пробирки IMPROVACUTER с активатором свертывания (SiO2) для получения сыворотки.
Для серологической диагностики данной инфекции широко используется выявление специфических антител против капсульных и клеточных антигенов. Серологические исследования по выявлению специфических антител в сыворотках крови свиней осуществляли методом непрямого ИФА с помощью иммуно-ферментных тестов: капсульные и клеточные антигены Actinobacillus pleuropneumoniae выявляли диагностическим набором ID Screen APP Screening Indirect (ID VET, Франция); Apx4-токсин - диагностическим набором Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) Antibody Test Kit (APP-ApxIV Ab test, IDEXX, США).
Результаты и обсуждение. Результаты иммунологического исследования сывороток крови от поросят разных возрастов и откормочных свиней (табл.) свидетельствуют о наличии специфических антител против Actinobacillus pleuropneumonia, а также показывают их динамику в разновозрастных группах животных, что обуславливает необходимость проведения вакцинации животных.
Таблица. Уровень специфических антител против Actinobacillus pleuropneumonia у свиней разного возраста
Возраст, дн. Цех/Участок плем. репродуктор Учет реакции ИФА
отр. сомн. полож % полож. уровень серопоз.
23 1секц.- опорос 1 2 7 70 47,96
42 7 секц.- доращ. 8 1 1 10 18,05
59 5 секц.- доращ. 10 0 0 0 7,78
72 4 секц.- доращ. 10 0 0 0 6,83
190-200 откорм 4 0 6 60 43,81
В результате проведения серологического мониторинга установлено, что наличие специфических антител против Actinobacillus pleuropneumonia в сыворотках крови подсосных поросят в возрасте 23 дня указывает на контакт животных родительского стада (свиноматок) с данным возбудителем. У животных в возрасте между 23-м и 42-м днём происходит резкое снижение уровня коло-стрального иммунитета против Actinobacillus pleuropneumoniae и создаются предпосылки для дальнейшего развития так называемого «раннего проявления актинобациллезной плевропневмонии», что может свидетельствовать о стойком эпизоотическом неблагополучии по данной болезни.
Острая форма актинобациллезной плевропневмонии свиней на ООО «ПсковАгроИн-вест» наблюдалась у животных спустя 5-10 дн. с момента их перевода на откорм, т.е. в возрасте 100 дн. Животные в этом возрасте не защищены от Actinobacillus pleuropneumoniae, в данный период наблюдается их активное пе-реболевание. Поскольку иммунизация поголовья против этого возбудителя на предприятии не проводилась, очевидна циркуляция Actinobacillus pleuropneumoniae в стаде, на что также указывает присутствие специфических антител у животных в возрасте 190-200 дн.
Выводы. Результаты серологических исследований, проведённых в возрастном аспекте на поросятах и взрослых свиньях, показали, что
иммунитет поголовья свиней в хозяйстве ООО «ПсковАгроИнвест» неоднородный, то есть присутствуют животные с низкими, средними и высокими титрами антител против возбудителя актинобациллёзной плевропневмонии свиней. С учётом динамики специфических колостральных антител у поросят подсосного периода необходима иммунизация свиней против актинобациллезной плевропневмонии свиней в возрасте 32-35 дн. с последующей ревакцинацией через 3 нед. Проведение серологического мониторинга в периоды выращивания и откорма свиней облегчает идентификацию возбудителя актинобациллёзной плевропневмонии и создаёт предпосылки для планирования противоэпизоотических мероприятий.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Грисслер А. и др. Болезни свиней... Киев: ООО «Аграр Медиен Украина», 2010.
2. Кузьмин В. А., Гречухин А. Н. Методические указания. СПб: СПбГАВМ-ООО «Кронвет» 2009, 48 с.
3. Орлянкин Б. Г., Мишин А. М. Ветеринария Кубани 2010, 3, 15-17.
4. Шевцов А. А., Русалев В. С., Ширяев Ф. А. и др. Промышленное и племенное свиноводство 2008, 4, 31-35.
5. Schaller A., Kuhnert P., De La Puente-Redondo V. A. Vet. Microbiol. 2000,74, 365-376.
6. Straw B. E., D'Allaire S., Mengeling W. I. et al. In: Diseases of Swine. Iowa State University Press, Ames, Iowa. 1999, 343-354.
APPLICATION OF INDIRECT ELISA FOR SEROLOGICAL MONITORING ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIA PIGS
Palazyuk S. V.1, Kuzmin V. A.2, Fogel L. S.2, Kudryavtseva A. V.2, Savenkov K. S.2
'OOO "PskovAgroInvest", Pskov region, village Solovyi; 2St. Petersburg State Academy of Veterinary Medicine, St. Petersburg, Russia
Actinobacillus pleuropneumonia pigs - highly contagious disease, which is registered in many countries with developed industrial pig and brings considerable damage. Purpose - serological monitoring by indirect ELISA for the detection of age dynamics of specific antibodies against Actinobacillus
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.