КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАРКЕРОВ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БОЛЬНЫХ РАННИМ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ
© 2007 г. Ж.М. Салмаси, Л.Ю. Семенова, А.Н. Казимирский, Т.К. Логинова, Г.В. Порядин, Н.А. Шостак
Российский государственный медицинский университет, Москва, Россия
Поступила: 23.10.05 г. Принята: 16.10.07 г.
Проведен сравнительный анализ поверхностных маркеров лимфоцитов периферической крови и синовиальной жидкости 9 больных ранним ревматоидным артритом методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител. Показано, что у больных ранним ревматоидным артритом наблюдается снижение общего количества Т-лимфоцитов как в периферической крови, так и в синовиальной жидкости за счет субпопуляции хелперно-индукторных Т-лимфоцитов. У больных наблюдается усиленный выход в очаги воспаления в суставах ЕК-клеток, а в периферической крови отмечается существенное увеличение В-лимфоцитов разных стадий дифференцировки. В синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом зарегистрировано более значимое повышение экспрессии маркеров активации лимфоцитов CD25, CD71 и HLA-DR. Характерной особенностью для больных ревматоидным артритом является очень высокое содержание FasL+ в синовиальной жидкости. Увеличение экспрессии Fas лиганда на лимфоцитах в синовиальной жидкости, по-видимому, является одним из механизмов повреждения хряща через запуск Fas-опосредованного апоптоза хондроцитов. Сделан вывод о различии поверхностных рецепторов лимфоцитов периферической крови и лимфоцитов пораженных воспалительным процессом суставов. В периферической крови наблюдается существенное увеличение содержания В-лимфоцитов разной стадии дифференцировки, а в синовиальной жидкости резкое повышение содержания ЕК-клеток и лимфоцитов, несущих Fas-лиганд. Сделан вывод о различии поверхностных рецепторов лимфоцитов периферической крови и лимфоцитов пораженных воспалительным процессом суставов. В периферической крови наблюдается существенное увеличение содержания В-лимфоцитов разной стадии дифференцировки, а в синовиальной жидкости резкое повышение содержания ЕК-клеток и лимфоцитов, несущих Fas-лиганд.
Ключевые слова: ревматоидный артрит, маркеры активации лимфоцитов, кровь, синовиальная жидкость
Ревматоидный артрит (РА) является хроническим системным воспалительным заболеванием с прогрессирующим поражением суставов по типу эрозивно-деструктивного полиартрита [1, 2, 3]. РА — одно из наиболее частых аутоиммунных ревматических заболеваний, в патогенезе которого преобладает им-мунокомплексный механизм поражения.
Согласно последним данным заболевание характеризуется выраженным активацион-ным процессом в лимфоцитах периферической крови и синовиальной жидкости [4]. При этом в периферической крови больных обнаруживается активация 1Ъ2 лимфоци-
тов, а в синовиальной жидкости преобладает активация Th1 лимфоцитов [1, 5]. Van der Graaff с соавторами сообщают, что в периферической крови больных РА обнаруживается повышение продукции ИФНу (Th1) и IL-4 (Th2) CD4 +-клетками [6]. При этом обнаружено, что процент Th2 лимфоцитов больше в периферической крови, а в синовиальной жидкости больше Th1 лимфоцитов. Эти данные подтверждаются другими исследователями — Th1 клеточный ответ внутри суставов доминирует, что может быть объяснено селективной миграцией Th1 клеток в сустав или периферической супрессией их активности [7]. По данным Tak P.P., при РА возникает повышение инфильтрации синовии СЭ4+Т-клетками или СЭ20+В-клетками [8]. Уровень экспрессии
Адрес: 117997 Москва, ул. Островитянова 1, РГМУ. E-mail: jean@rsmu.ru
Ь-селектина на Т- и В-лимфоцитах коррелирует с активностью заболевания.
Таким образом, данные литературы свидетельствуют, что РА представляет собой сложное заболевание, при обострении которого наблюдается одновременно два вида активации иммунокомпетентных клеток — Т-лим-фоцитов в очаге поражения и В-лимфоцитов в периферической крови.
С целью изучения патогенеза иммунных нарушений при ревматоидном артрите нами было проведено сравнение результатов исследования маркеров лимфоцитов периферической крови и синовиальной жидкости больных ранним ревматоидным артритом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Пациенты
Исследование проведено на лимфоцитах 9 пациентов ранним ревматоидным артритом (РА) (длительностью болезни от 3-х до 6 месяцев) с выраженным экссудативным процессом в суставах. Диагноз РА ставился на основании критериев Американской Ревматологической Ассоциации. У всех больных диагноз был подтвержден рентгенологически. На момент обследования больные не получали базисной терапии. Контролем служили данные, полученные от 19 практически здоровых людей в возрасте от 20 до 35 лет.
Выделение лимфоцитов и определение поверхностных маркеров
Для проведения иммунологического исследования кровь забирали из локтевой вены, а синовиальную жидкость получали при пункции крупных суставов и стабилизировали раствором трилона Б. Выделение взвеси лимфоцитов проводили в градиенте плотности фиколл-верографин по методу A. Boyum. Методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител серий ИКО и ЛТ (Россия) определяли содержание в периферической крови или суставной жидкости лимфоцитов, экспрессирующих антигены CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD20, CD72, CD38, CD23, CD25, CD71, HLA-DR, CD95, CD22, CD54, mIgM, mIgG.
Результаты обрабатывали на компьютере методом вариационной статистики с помощью пакета прикладных программ Statistica, достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Полученные результаты свидетельствуют, что у больных ранним ревматоидным артритом наблюдается снижение общего количества Т-лимфоцитов, как в периферической крови, так и в синовиальной жидкости (табл. 1), за счет субпопуляции хелперно-индукторных Т-лимфоцитов. При этом наблюдалось более значительное снижение Т-хелперов в периферической крови обследуемых больных.
Показано, что в синовиальной жидкости и периферической крови у обследованных больных не отмечалось существенных изменений содержания в крови цитотоксических лимфоцитов (табл. 1).
Следует отметить, что в синовиальной жидкости больных наблюдалось значительное увеличение количества Т-лимфоцитов с фенотипом СВ3+СВ4+СБ8+ до 10,74 ± 5,89%. Эта субпопуляция Т-лимфоцитов относится к малодифференцированным клеткам иммунной системы. Их появление в заметном количестве является результатом функциональной недостаточности антигенпрезентирую-щих клеток.
При оценке естественных киллеров (СБ16) выявлено снижение содержания этой популяции лимфоцитов в периферической крови до 8,52 ± 1,93% по сравнению с показателями здоровых людей, в то же время, в синовиальной жидкости происходило значительное увеличение числа цитотоксических клеток до 23,05 ± 5,59%.
Количество естественных киллеров, реализующих свою цитотоксическую функцию (СБ56), у обследованных больных было повышенным по сравнению с контролем, при этом в синовиальной жидкости наблюдалось значительное увеличение их числа — более чем в 2,5 раза (табл. 1).
Общее количество В-лимфоцитов у обследованных больных более значимо повышалось в периферической крови (табл. 1). Это увеличение связано, в первую очередь, с ростом дифференцированных В-лимфо-цитов. Количество примированных антигеном В-лимфоцитов (СЭ72 + -клетки) оставалось практически неизмененным по сравнению со здоровыми донорами. Нами отмечено повышение содержания в крови и синовиальной жидкости количества плазматических клеток (СЭ38 + ), завершающих процесс дифференциации В-лимфоцитов. Этот показатель был более высоким в синовиальной жидкости.
Таблица 1. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови и синовиальной жидкости больных ранним ревматоидным артритом в сравнении со здоровыми донорами
(в %)
Популяция Маркеры Здоровые Больные (n = 9)
лимфоцитов лимфоцитов (n = 19) периферическая синовиальная
кровь жидкость
Т-лимфоциты ОТ3 66,74±0,99 44,63±3,35* 40,76±1,93***
CD4 36,71±1,26 25,15±1,45*** 29,14±2,79**
CD8 26,34±0,75 26,95±5,68 25,99±3,45
ЕК-клетки CD16 12,84±0,68 8,52±1,93** 23,05±5,59**
CD56 4,78±0,52 9,07±2,99 13,87±3,04**
B-лимфоциты CD20 9,97±0,42 17,10±2,72*** 12,10±2,37
CD38 7,33±0,52 10,97±2,43 12,12±2,97*
mIgM 5,98±0,39 13,70±2,67*** 12,73±2,18***
mIgG 6,27±0,75 10,95±1,69** 13,30±3,63**
Примечание: * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0,001 (по сравнению со здоровыми донорами).
Содержание в крови зрелых лимфоцитов, экспрессирующих мембранные иммуноглобулины, у больных повышалось, причем для 1дМ + -лимфоцитов это повышение было существенным в периферической крови, а в синовиальной жидкости повышение было существенным для 1дС + -лимфоцитов (табл. 1).
У обследованных больных выявлено двукратное повышение уровня экспрессии Х- и %-цепей иммуноглобулинов лимфоцитами синовиальной жидкости (p < 0,005) по сравнению с аналогичными показателями здоровых людей. Повышение количества В-лимфоци-тов, несущих суррогатные Х- и %-цепи иммуноглобулинов, — свидетельство реорганизации генома, ведущее к увеличению специфичности синтезируемых антител.
Изучение основных популяций и субпопуляций лимфоцитов у больных ранним ревматоидным артритом показывает, что в периферической крови наблюдаются выраженные изменения со стороны Т-клеточного звена за счет снижения хелперно-индукторных клеток с сохранением количества цитотоксиче-ских лимфоцитов. Отмечается понижение числа естественных киллерных клеток в периферической крови и значительное повышение В-лимфоцитов разной степени диффе-ренцировки.
В синовиальной жидкости наблюдается более глубокая Т-лимфоцитопения за счет субпопуляции хелперно-индукторных клеток. В то же время количество естественных киллеров (CD16) и ЕК-клеток, реализующих свою
цитотоксическую функцию (CD56) в синовиальной жидкости было значительно повышенным. При этом, при ревматоидном артрите увеличение содержания В-лимфоцитов более характерно для периферической крови.
Таким образом, у больных ревматоидным артритом наблюдается накопление ЕК-клеток в синовиальной жидкости и преимущественное увеличение
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.