научный журнал по химии Прикладная биохимия и микробиология ISSN: 0555-1099

ГОЛЯСНАЯ Н.В., МАСЛЕННИКОВА И.Л. — 2007 г.

Бактериальная биолюминесценция использована для выявления общей токсичности (тест МИТ) и генотоксичности (SOS-lux-тест) ряда веществ, морских и пресных вод. SOS-индуцируемая люминесценция клеток E. coli WP2s (cda::luxCDABE) была выше, чем у E. coli C 600 (cda::luxCDABE) при 37°С и pH 6.5. Мутагенный эффект N-метил--нитро-N-нитрозогуанидина (МННГ), митомицина С, пероксида водорода по индукции свечения клеток E. coli WP2s проявлялся при меньших концентрациях, чем при оценке частоты реверсий. Общая токсичность по ингибированию свечения показана для пероксида водорода, ионов цинка и кадмия при их низком содержании в растворе. Микробиолюминесцентным методом выявлены районы Краснодарского края, где морские и пресные воды оказывали токсическое действие на свечение.

2007

КОВАЛЕНКО Г.А., ПЕРМИНОВА Л.В., ПЛАКСИН Г.В., ТЕРЕНТЬЕВА Т.Г. — 2007 г.

Глюкоамилаза препарата Глюкоаваморин иммобилизована адсорбцией на углеродном носителе марки Сибунит. Полученный биокатализатор изучен в процессе осахаривания крахмала (гидролиз декстринов). Исследования по влиянию адсорбционной иммобилизации на кинетические характеристики глюкоамилазы, в том числе на константы скорости термоинактивации, показали, что при иммобилизации Глюкоаваморина на углеродном носителе Сибуните наблюдается 103-кратное повышение термостабильности глюкоамилазы по сравнению с ферментом в растворе. Значительный стабилизирующий эффект оказывает присутствие субстрата (декстрины) в реакционной среде, причем увеличение концентрации декстринов приводит к повышению термостабильности иммобилизованного фермента. Суммарный эффект стабилизации глюкоамилазы при ее адсорбции на углеродном носителе Сибуните в присутствии 53%-ных растворов декстринов составляет 105 раз по сравнению с ферментом в растворе. Биокатализатор для процесса осахаривания крахмала, приготовленный на основе иммобилизованного на Сибуните Глюкоаваморина, отличается высокой операционной стабильностью: при 60°С время его полуинактивации превышает 30 сут.

ЖУКОВ Д.В., КАЛЮЖНЫЙ С.В., МУРЫГИНА В.П. — 2007 г.

Исследовали потребление алифатических углеводородов бактериями Rhodococcus ruber Ас-1513-D и Rhodococcus erythropolis Ас-1514-D при росте на смеси жидких н-алканов и дизельном топливе. Обнаружили снижение активности штаммов по отношению к углеводородам дизельного топлива по сравнению с углеводородами использованной смеси жидких парафинов. Выявлены различия в росте штаммов и потреблении ими субстратов, в связи с чем можно предположить, что эти два штамма используют различные механизмы захвата углеводородов.

ЗЕЙНАЛОВ О.А., ЛОПАТИН С.А., СКРЯБИН К.Г., ХАТУНЦЕВА С.А., ЭЛЬДАРОВ М.А. — 2007 г.

Клонирован ген ацилазы глутарил-7-аминоцефалоспориновой кислоты (Gl7ACА-ацилазы), бактерии Brevundimonas diminuta (BrdGl7ACA), – промышленного фермента, широко используемого в современных биокаталитических технологиях получения бета-лактамных антибиотиков. Созданы эффективные системы экспрессии для получения “нативной” рекомбинантной BrdGl7ACA и ее аналогов, модифицированных присоединением аффинных групп – хитинсвязывающего домена хитиназы А1 и гексагистидиновой последовательности. Показано, что продуцируемые в клетках E. coli рекомбинатные гибридные белки, как и “нативная” Gl7ACА-ацилаза подвергаются правильному автопротеолитическому процессингу с образованием функционально активных ферментов и могут быть выделены в одну стадию аффинной хроматографии с высоким выходом.

МОРОЗОВА О.В., ШЛЕЕВ С.В., ШУМАКОВИЧ Г.П., ЯРОПОЛОВ А.И. — 2007 г.

Проанализирован механизм функционирования лакказа-медиаторных систем (ЛМС) при деградации ксенобиотиков с участием “истинных” редокс-медиаторов и усилителей действия лакказ. Приведены структурные формулы наиболее известных медиаторов лакказ, описанных в литературе, а также соединений, которые можно использовать в качестве усилителей действия фермента. Описаны конкретные примеры использования ЛМС в биотехнологии.

КОСМАЧЕВСКАЯ О.В., ТОПУНОВ А.Ф. — 2007 г.

Предложен спектрофотометрический метод определения содержания гемоглобинподобных белков, позволяющий определять их концентрацию в смесях различного состава. Метод основан на сравнении величин оптической плотности разных окислительно-восстановительных форм белков при совмещении их спектров в изобестической точке. При расчетах используются коэффициенты, определенные авторами. Предложенный метод прост и не требует специальных процедур для своего выполнения. Метод проверен на растворах миоглобина разной концентрации и содержащих другие белки, и на легоглобине – миоглобинподобном белке бобовых растений.

2007

БАЛАНДИНА Г.Н., ГОПТАРЬ И.А., ЛЫСОГОРСКАЯ Е.Н., ФИЛИППОВА И.Ю. — 2007 г.

Разработан метод определения протеолитической активности аспартильных протеиназ с использованием известных флуорогенных окрашенных субстратов. В методике используются хромофорные свойства динитрофенильной (ДНФ) группы. Предлагаемый подход включает отделение исходного пептида и последующее измерение поглощения при 360 нм раствора ДНФ-содержащего С-концевого фрагмента, образующегося при его ферментном расщеплении. Методика была использована для определения активности химозина теленка, пепсинов из различных источников, а также промышленных препаратов, содержащих смесь ферментов без предварительного обессоливания. Метод прост в осуществлении и может быть применен в производственных условиях.

ВАЛУЕВ И.Л., ВАЛУЕВ Л.И., ВАНЧУГОВА Л.В., ПЛАТЭ Н.А., СТАРОСЕЛЬЦЕВА Л.К., СЫТОВ Г.А., ТАЛЫЗЕНКОВ Ю.А., УЛЬЯНОВА М.В. — 2007 г.

В опытах на животных показана принципиальная возможность проникновения в кровоток нативных белков при пероральном введении их разбавленных растворов. Эксперименты, проведенные in vitro, позволили предположить, что использование разбавленных растворов приводит к уменьшению скорости протеолитического гидролиза белков, а также ускоряет их диффузию через слизистую оболочку кишечника.

КОНОНОВА С.В., ЛАУРИНАВИЧЮС К.С., ТРУТКО С.М. — 2007 г.

Разработана система тестирования in vitro С–Р-лиазы E. coli, фермента, расщепляющего связь С–Р в фосфонатах. Показано, что для проявления С–Р-лиазной активности в бесклеточном экстракте НАДН, АТФ и АТФ-регенирирующая система необходимые, но не единственные компоненты реакционной смеси. Получены данные в пользу предположения о том, что глюкозо–6-фосфат и(или) глюкоза активируют С–Р-лиазную реакцию, выступая в роли предшественников при образовании одного из промежуточных продуктов реакции – 1-(алкилфосфоно)рибозы. Наиболее вероятным претендентом на роль конечного акцептора фосфатной группы является гуанин.

АЛПЕЕВА И.С., САХАРОВ И.Ю. — 2007 г.

Оптимизированы условия проведения реакции окисления люминола пероксидом водорода в присутствии пероксидазы (КФ 1.11.1.7), выделенной из листьев Королевской пальмы Roystonea regia. Показано, что диапазон рН (8.3–8.6), в котором регистрируется максимальная хемилюминесценция, одинаков для пероксидаз пальмы и хрена. Варьирование концентрации трис-буфера приводит к изменению интенсивности свечения, причем максимальная хемилюминесценция наблюдается в 30 мМ растворе. Предел чувствительности определения фермента по реакции окисления люминола пероксидом водорода составил 1 пМ. Принципиальной особенностью пероксидазы пальмы является генерирование ею более стабильного хемилюминесцентного сигнала, что в сочетании с ее собственной высокой стабильностью позволяет говорить о перспективности применения этого нового фермента в аналитической практике.

АКИМОВА Г.П., ВАСИЛЬЕВА Г.Г., ГЛЯНЬКО А.К., МАКАРОВА Л.Е., СОКОЛОВА М.Г. — 2007 г.

Проанализирован один из возможных физиологических механизмов бобово-ризобиального симбиоза, заключающийся в регуляции макросимбионтом интенсивности окислительных процессов в ответ на заражение ризобиями. В основу анализа положены результаты по содержанию активных форм кислорода ( , Н2О2), активности антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы, каталазы, пероксидазы), интенсивности перекисного окисления липидов с участием липофильных фенольных соединений макросимбионта.

АСРИЕЛИ Т.В., ВЛАСОВА И.И., ГАВРИЛОВА Е.М., ДАНИЛОВ В.С. — 2007 г.

Представлены методические основы определения антибиотиков с помощью биолюминесцентного теста и сыворотки крови. Антибиотики ингибируют люминесценцию генно-инженерного штамма Escherichia coli. Степень ингибирования зависела от типа антибиотика, его концентрации и времени инкубации клеток и антибиотика. Наибольшая чувствительность клеток наблюдалась по отношению к аминогликозидным антибиотикам: для гентамицина и стрептомицина она составила 85 ± 10 нг/мл. Чувствительность системы к ряду антибиотиков существенно возрастала, если клетки предварительно активировали сывороткой крови. Для гентамицина и стрептомицина чувствительность метода в присутствии сыворотки составила 2.5 ± 0.5, для тетрациклина 45 ± 8 нг/мл. Использование сывороток, содержащих антитела к определяемому антибиотику, обеспечило высокую специфичность биосенсора. Сравнение люминесценции E. coli, активированных нормальной и специфической антисывороткой, после их инкубации с антибиотиком позволяет определить тип антибиотика и его количественное содержание в образце. Анализ антибиотиков с помощью рекомбинантных E. coli характеризуется высокой точностью, чувствительностью, специфичностью, простотой и малым временем проведения измерений.

ЕШИНИМАЕВ Б.Ц., ТРОЦЕНКО Ю.А., ХМЕЛЕНИНА В.Н., ЦЫРЕНЖАПОВА И.С. — 2007 г.

Описан способ детекции и количественного анализа эктоина в бактериальной биомассе методом нормально-фазовой ВЭЖХ с УФ-детектором при 230 нм. Глутамат и сахароза, накапливаемые бактериями наряду с эктоином, не мешают количественному анализу. Определение содержания эктоина предложенным методом у гало(алкало)фильных метанотрофов Methylobacter marinus 7C и Methylomicrobium alcaliphilum 5S выявило максимальное накопление эктоина в количестве 5 и 12% от веса сухих клеток при 4 и 6% NaCI соответственно.

ДАВЫДОВ Р.Э., ДЕНИВАРОВА Н.А., КУРИНЕНКО Б.М., ЯКОВЛЕВА Г.Ю. — 2007 г.

Наличие в среде культивирования Echerichia coli K12 200 мг/л 2,4,6-тринитротолуола (ТНТ) сопровождалось уменьшением общего количества клеток, количества колониеобразующих единиц (КОЕ), увеличением проницаемости внешней липопротеидной мембраны и показателя преломления клеток. Отмечалось изменение формы части клеток с палочковидных на кокковидные, уменьшались их размеры. Отмечалось уменьшение удельной скорости утилизации глюкозы и количества НАДН (НАДФН) в клетках. Изменения морфофизиологических параметров носили обратимый характер и после снижения концентрации ТНТ в процессе культивирования стремились к нормализации.

КУПЛЕТСКАЯ М.Б., КУРАКОВ А.В., НЕТРУСОВ А.И., СУХАЧЕВА М.В. — 2007 г.

С помощью метода накопительных культур выделено 8 штаммов гриба Geotrichum candidum – продуцентов лактатоксидазы. Источником выделения служили различные пробы сквашенных овощей и навоза. Варьирование содержания глюкозыб лактата и степени аэрации позволило достичь активности лактатоксидазы до 130–140 ед. в клетках, выращенных в 1 л среды.

ГЮНТЕР Е.А., ОВОДОВ Ю.С. — 2007 г.

Каллусные и суспензионные культуры смолевки обыкновенной продуцировали пектиновые полисахариды, близкие по строению пектинам интактного растения. В составе пектинов в качестве основных компонентов содержались остатки D-галактуроновой кислоты, галактозы, арабинозы и рамнозы. Максимальное содержание пектинов отмечено в каллусе. Моносахаридный состав арабиногалактанов, выделенных из каллусных клеток и культуральной среды, был близок, при этом сохранялось соотношение арабинозы и галактозы 1 : (2.3–6.5). Арабиногалактаны из клеток и культуральной среды суспензионной культуры также имели сходное строение, соотношение арабиноза–галактоза составляло 1 : (1.5–1.8). Арабиногалактаны суспензионных культур отличались повышенным содержанием остатков арабинозы и пониженным содержанием остатков галактозы в сравнении с каллусными культурами. Наибольшее содержание арабиногалактана обнаружено в культуральной среде суспензионных культур.

АБЕЛЯН В.А., АБЕЛЯН Л.А., АДАМЯН М.О., АКОПЯН Ж.И., МАРКОСЯН А.А., ЭКАЖЕВ З.Д. — 2007 г.

-Фруктофуранозидазы (КФ 3.2.1.26) Aspergillus niger St-0018 и A. foetidus St-0194 использованы для получения фруктоолигосахаридов (ФОС) в периодических и непрерывных условиях. Наиболее эффективные иммобилизованные биокатализаторы получены включением клеток в гель альгината кальция. Установлена возможность превращения остаточной сахарозы в палатинозу и трегалулозу под действием изомальтулозсинтазы (КФ 5.4.99.11).

БЕРЛИНА А.Н., ДЗАНТИЕВ Б.Б., ЖЕРДЕВ А.В., САХАРОВ И.Ю. — 2007 г.

Разработан иммуноферментный анализ с колориметрической детекцией сульфаметоксипиридазина (СМП), одного из наиболее широко используемых сульфамидов. В качестве фермента-маркера применена анионная пероксидаза сои. Диапазон определения СМП – 1.3–63.0 нг/мл при пределе детекции 0.4 нг/мл. Среднеквадратичное отклонение результатов анализа не превышало 6%. Показано, что использование в рабочем буфере 0.15% казеина предотвращало влияние матрикса молока на результаты анализа. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности разработанного метода, чувствительность которого на несколько порядков превосходит предельно допустимую концентрацию сульфамидов в молоке (100 мкг/л).